Гистохимическое исследование РНК кожи в динамике посттравматического периода

Для выяснения возможности диагностики давности возникновения механической травмы нами гистохимическим методом исследованы топография и содержание РНК в коже и последующих мышцах в эксперименте и при судебно-медицинском исследовании трупов.

Эксперименты выполнены на белых беспородных крысах-самцах массой 200—250 г. Животным, после наркотизации гексеналом, специальным устройством по середине левой задней конечности причиняли повреждения мягких тканей и открытый перелом кости. Крыс декапитировали сразу после нанесения травмы и спустя 30 мин.; 6, 12 и 24 часа после нее. На каждом этапе эксперимента изучены кожа и мышцы из 10 животных. В качестве контроля были изучены кожа и мышцы из симметричных неповрежденных участков.

Секционный материал получали от трупов людей, умерших сразу после причинения травмы, а также с длительностью посттравматического периода в 30 минут, 6, 12 и 24 часа (в каждой временной группе по 10 трупов лиц мужского пола).

Фрагменты кожи и мышц фиксировали смесью Карнау и заливали в парафин. Срезы окрашивали метиловым зеленым и пиронином по методу В.И. Шкурко и В.В. Язвикова (1964). Специфичность пиронинофилии исследуемых структур установлена специальным контролем.

Результаты наших исследований показали, что в клетках эпидермиса экспериментальных животных, декапитированных сразу после причинения травмы, цитоплазма характеризуется высокой степенью пиронинофилии. Ядра клеток эпидермиса содержат нежную глыбчатость, окрашиваемую метиловым зеленым и крупные пиронинофильные ядрышки. В клетках сальных желез пиронинофильная глыбчатость выявляется во всей цитоплазме, имея тенденцию скапливания в ее базальных участках.

Резкой пиронинофилией цитоплазмы отличаются и некоторые соединительно-тканные клетки дермы.

При длительности посттравматического периода в 30 минут вакуолизированные клетки эпидермиса практически не содержат пиронинофильной субстанции. В прочих клетках эпидермиса ее накопление не отличается от предыдущего этапа эксперимента. Отмечается увеличение пиронинофильной глыбчатости в клетках сальных желез. В дерме резко увеличивается число соединительно-тканных клеток, характеризующихся высокой степенью пиронинофилии цитоплазмы.

Через 6 часов после причинения механической травмы вакуолизированные клетки эпидермиса не содержат пиронинофильной зернистости. Интактные клетки по степени пиронинофилии не отличаются от эпителиальных клеток в контроле. Резко усиливается пиронинофилия клеток эпителиальных влагалищ волос. В цитоплазме клеток сальных желез равномерная заполненность пиронинофильной зернистостью. В ядрах этих клеток выявляются пиронинофильные ядрышки. В дерме довольно много клеток характеризуется высокой степенью пиронинофилии цитоплазмы.

При длительности посттравматического периода в 12 часов топография и содержание пиронинофильной субстанции в клетках эпидермиса, сальных желез и эпителиальных волосяных влагалищ сходны с таковыми, выявленными в предыдущем эксперименте.

Через 24 часа после причинения травмы в клетках эпидермиса отмечается снижение содержания пиронинофильной субстанции. Вместе с тем, в ядрах клеток эпидермиса выявляются крупные пиронинофильные ядрышки. Ядра характеризуются наличием нежной сети хроматина, окрашивающейся метиловым зеленым, причем наиболее крупные конгломераты этой сети имеют тенденцию группироваться на периферии ядер по оболочке. Пиронинофильная зернистость появляется и в цитоплазме вакуолизированных клеток, причем гранулы пиронинофильной субстанции заполняют все участки цитоплазмы, свободные от вакуолей. Снижается и содержание пиронинофильных гранул в клетках сальных желез. В клетках дермы также уменьшается содержание пиронинофильного вещества.

Во всех случаях окраска пиронином снималась предварительной инкубацией срезов в растворе РНКазы. Следовательно, мы вправе идентифицировать пиронинофильное вещество, выявляемое на наших срезах, как РНК.

При исследовании экспертного материала установлено, что в эпидермисе лиц, погибших сразу после нанесения травмы, содержание пиронинофильного вещества невелико. Наибольшей степенью пиронинофилии отличаются клетки базального слоя. В ядрах клеток выявляется нежная сеть, окрашиваемая метиловым зеленым, и крупные пиронинофильные ядрышки. В дерме практически отсутствуют клетки с пиронинофильной цитоплазмой.

При длительности посттравматического периода в 30 минут кожа характеризуется низким содержанием пиронинофильной субстанции в цитоплазме клеток эпидермиса. Больше РНК выявляется в клетках базального слоя. В ядрах большинства клеток, даже тех, цитоплазма которых вакуолизирована, выявляются крупные пиронинофильные ядрышки. В клетках сальных желез пиронинофильного вещества немного. Гранулы его локализуются, в основном, в базальных отделах цитоплазмы клеток.

В эпидермисе трупов людей, погибших через 6 часов после механической травмы, содержание РНК продолжает падать. Это особенно относится к клеткам базального слоя. Наибольшее количество РНК обнаруживается в клетках слоя шиповатых клеток. Вакуолизированные клетки эпидермиса не содержат пиронинофильной субстанции. В дерме практически отсутствуют клетки с пиронинофильной цитоплазмой.

Дальнейшее снижение РНК в эпидермисе отмечается у трупов людей с давностью посттравматического периода в 12 часов.

При длительности посттравматического периода в 24 часа в дерме отсутствуют клетки с пиронинофильной цитоплазмой. Таким образом, сопоставляя результаты проведенных исследований, можно выявить прогрессивное снижение содержания РНК в коже трупов людей в зависимости от длительности посттравматического периода. В литературе имеются сведения об уменьшении содержания РНК во внутренних органах в зависимости от давности наступления смерти. Очевидно и в наших случаях некоторое уменьшение содержания РНК можно объяснить посмертными процессами. Однако учитывая то обстоятельство, что во всех случаях исследований изъятие материала для гистохимического исследования производили через 24 часа после остановки сердца, динамику снижения пиронинофилии следует объяснить увеличением числа вакуолизированных клеток.

Вышеизложенное дает основание считать, что динамика содержания РНК прижизненно травмированной кожи может явиться одним из критериев длительности посттравматического периода.