Использование текстильных красителей в качестве флюорохрома для обнаружения сперматозоидов

/ Раданов С.Д., Павлов П.С. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1976 — №1. — С. 34-37.

Раданов С.Д., Павлов П.С. Использование текстильных красителей в качестве флюорохрома для обнаружения сперматозоидов

УДК 340.624.4:612.616.2-086.15

Кафедра судебной медицины (зав.— проф.С. Д. Раданов) Варненского медицинского факультета, Болгария

Использование текстильных красителей в качестве флюорохрома для обнаружения сперматозоидов. Раданов С.Д., Павлов П.С. Суд.-мед. эксперт., 1976, № 1, с. 34.

Доказана возможность использования текстильных красок для люминесцентномикроскопического обнаружения сперматозоидов в мазках и пятнах, причем достигается контрастная люминесценция головки и хвоста.

Таблица 1.

 

USING TEXTILE DYES AS FLUOROCHROMES FOR THE DETECTION OF SPERMATOZOA

Radanov S. D., Pavlov P. S.

40 textile dyes were tested in luminescent microscopical analysis of spermatozoa. The most suitable was the water solution of deorlin lahid gelb-5GL, ostentren blau-BCL, kubov bright green-S and G-, schwefel-braun-MR, protion brilliant rot-M-8BS. Some of the dyes being dissolved in veronal-acetate buffer (pH 4) gave a different luminescence with the heads and tails of spermatozoa.

ссылка на эту страницу

Ограниченный спектр специальных флюорохромов для люминесцентно-микроскопического обнаружения сперматозоидов, довольно высокая стоимость и дефицитность побудили нас изучить возможность использования для этой цели текстильных красителей, а также выяснить оптимальные условия для их применения.

Исследовали 40 текстильных красителей из четырех основных групп — 15 диариловых, 16 идантреновых (кубовых), 6 проционовых и 3 серных. Разница между красителями заключалась в различии химической структуры, а между красителями отдельных групп — в активных группах. Красителями обрабатывали мазки свежей спермы, семенные пятна на различных предметах-носителях различной давности и с разными биологическими примесями (кровь, секрет влагалища, секрет носа и др.). Сперматозоиды окрашивали как в пятне, так и в вытяжке из него. Исследуемый материал наносили на предметное стекло, накапывали 2 капли водного разведения 1:10000 соответствующего красителя и высушивали при 37°. Рассматривали в люминесцентный микроскоп (мы пользовались микроскопом MЛ-2A). Результаты отражены в таблице.

Обозначения: — люминесценция отсутствует; -)- слабая: ++ средняя; + + + сильная; + + + + очень яркая.

 

Из таблицы видно, что наилучшие результаты дают следующие красители.

  1. Диариловые — деорлин лахид желтый-5GL: головка и хвост лю-минесцируют ярко желто-зеленым светом (оптимальное разведение 1:10 000); деорлин ярко-красный-R: головка и хвост люминесцируют желто-зеленым светом, оптимальное разведение 1:5000; сандокрин синий-BRL: ярко окрашивает только головку.
  2. Индантреновые — остентрен синий-BCL: головка и хвост люминесцируют ярко-зеленым цветом (оптимальное разведение 1:10000); кубовый ярко-зеленый-С и -Ж: головка и хвост люминесцируют ярко-зеленым цветом (оптимальное разведение 1:10 000). В этой группе некоторые красители, например цибинон серый-BG, дают люминесценцию только головки желтым цветом.
  3. Сернистые — шефел коричневый-MR: головка и хвост ярко люминесцируют зеленым цветом при разведении 1:10 000.
  4. Проционовые — процион ярко-красный-М8BS: головка люминесцирует красным цветом, а хвост дает слабую люминесценцию этого же цвета (разведение 1:10 000).

Для контрастного люминесцирования головки и хвоста провели комбинированное флюорохромирование. На объект капали по 2 капли двух различных красителей. Самой подходящей оказалась комбинация: процион ярко-красный-М8BS и деорлин лахид желтый-5GL. Головка при этом люминесцирует красным цветом, а хвост — желто-зеленым.

Наши исследования показали также, что некоторые красители, не обладающие флюорохромными качествами в водном растворе при определенном pH среды с использованием буфера, могут оказаться флюорохромами. Например, леофикс золотисто-желтый-Е6 дает сильную люминесценцию с ацетатным и веронал-ацетатным буфером pH 4,0, а с фосфатным буфером при таком же pH его люминесценция слабее. С этим красителем головка люминесцирует красным цветом, а хвост — желто-зеленым. Гликоколевый буфер для этих красителей не годится.

Наш опыт показал, что желательно сначала извлечь сперматозоиды из предмета-носителя, чтобы избежать первичной и вторичной люминесценции ткани. Их лучше всего экстрагировать 0,05% трипсиновым или 0,05% панкреатиновым раствором с последующим центрифугированием или отделением на виброустановке.

Вышеуказанные красители обеспечивают устойчивую яркую люминесценцию спарматозоидов в пятнах давностью более 10 лет, сохранившихся при комнатной температуре. Изготовленные препараты можно хранить много месяцев в качестве вещественного доказательства.

Выводы

  1. Текстильные красители деорлин лахид желтый-5GL, остентрен-синий-BCL, кубовый ярко-зеленый-С и -Ж, шефел коричневый-MR можно использовать в качестве флюорохромов для обнаружения сперматозоидов. Полученная люминесценция не уступает люминесценции стандартных флюорохромов, а в некоторых отношениях даже лучше их (ярче и дольше сохраняется).
  2. Наилучшие результаты при комбинированном окрашивании для получения контрастной раздельной люминесценции головки и хвоста дают процион ярко-красный-М-8BS и деорлин лахид желтый-5GL.
  3. Текстильные красители, которые в водном растворе не имеют флюорохромных качеств, приобретают их при определенном pH среды с использованием буфера. Некоторые красители, как, например, лео-фикс золотисто-желтый-Е6, дают различную по цвету люминесценцию головки и хвоста.
  4. Применение в практике текстильных красителей для люминесцентно-микроскопического обнаружения сперматозоидов выгодно благодаря доступности и дешевизне красителей и возможности использовать их в сильно разведенном виде.

похожие статьи

Установление наличия спермы в смешанных пятнах с секретом влагалища / Барсегянц Л.О. // Медицинская экспертиза и право. — 2010. — №4. — С. 30.

Применение колориметрических методов в экспертизе вещественных доказательств / Сидоров В.Л. // Медицинская экспертиза и право. — 2010. — №3. — С. 28-33.

Влияние ряда факторов на морфологическую структуру сперматозоидов в прямой кишке трупов при судебно-медицинской экспертизе мужеложства / Жакупова Т.З. — 2015.

Выявление спермина в пятнах спермы путем электрофореза на бумаге / Буреш Л. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №3. — С. 46-47.

О применении сока из клубней картофеля для обнаружения спермы на вещественных доказательствах / Тюрникова Ф.В. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №2. — С. 27-28.

больше материалов в каталогах

Обнаружение и исследование спермы