Новый метод определения групповой принадлежности крови в пятнах (Предварительное сообщение)

Основным методом обнаружения агглютиногенов в пятнах крови является метод абсорбции агглютининов, применение которого требует определенного количества исследуемого материала. Поэтому желательно изыскать способ, который позволил бы выявлять агглютиногены в минимальном количестве высохшей крови.

С этой точки зрения представляют интерес методы смешанной агглютинации и абсорбции-элюции как в отдельности, так и в сочетании друг с другом.

Принцип смешанной агглютинации заключается в следующем. Полные антитела двухвалентны. При соединении с соответствующим антигеном, содержащимся в мембране клеток или пятне крови, замещается одна валентность антитела, другая же остается свободной. Если к объекту с образовавшимся комплексом антиген—антитело добавить эритроциты, имеющие одноименный антиген и взвешенные в белковой среде, свободная валентность заместится при соединении с этим антигеном, следствием чего явится агглютинация эритроцитов.

Метод элюции базируется на возможности нарушения при температуре 50—55° комплекса антиген—антитело и отделении от него абсорбированных ранее антител, которые выявляются путем агглютинации добавляемых эритроцитов.

Таким образом, при обоих методах агглютинация тех или иных стандартных эритроцитов свидетельствует о присутствии в крови соответствующего антигена (табл. 1).

Метод смешанной агглютинации может дополняться элюцией антител.

С целью проверки эффективности метода абсорбции — элюции для обнаружения антигенов в очень малом количестве высохшей крови мы провели эксперименты с пятнами крови групп 0, А, В и АВ на предварительно проверенной марле, применив реакцию в модификации Ueno.

Объекты предварительно обрабатывали метиловым и абсолютным этиловым алкоголем. Ueno считает такую обработку очень важной — она ведет к «закреплению» антигена в предмете-носителе и, очевидно, препятствует взаимодействию агглютининов, содержащихся в крови, со стандартными эритроцитами, не нарушая абсорбционной способности агглютиногенов (срок обработки данными реагентами он не указывает).

Из марли, пропитанной кровью группы 0, А, В или АВ, вырезали небольшой кусочек, фиксировали метиловым алкоголем 3 мин. и высушивали на воздухе. От кусочка отделяли 3 ниточки длиной по 3—4 мм, каждую помещали в лунку для висячей капли. Ко всем ниточкам приливали по 2 капли абсолютного этилового алкоголя на 30 мин. Далее алкоголь отсасывали пастеровскими пипетками, ниточки высушивали на воздухе, добавляли по одной капле стандартных сывороток: к одной

ниточке — неразведенную иммунную (кроличью) сыворотку анти-А с титром 1: 128, к другой — иммунную (баранью) анти-В с титром 1:64, к третьей — иммунную (козью) анти-0(Н) с титром 1: 28. Так же поступали с контрольной марлей без крови. Абсорбция протекала 20—23 часа при температуре 4° (рефрижератор). Сыворотки удаляли и ниточки 5 раз промывали физиологическим раствором хлористого натрия. Ко всем ниточкам добавляли по маленькой капле 0, 75% взвеси в физиологическом растворе соответствующих стандартных эритроцитов групп А, В и 0 (в предварительных опытах установлено, что 0, 75% взвесь эритроцитов в данном случае более приемлема, чем 1 % взвесь, рекомендуемая Ueno). Препараты оставляли на 15 мин. при температуре 55° (термостат), а потом — при комнатной; через 15 (по Ueno), 30 и 45 мин. подвергали микроскопическому исследованию. При положительном результате у краев ниточки наблюдалась агглютинация эритроцитов, которая постепенно усиливалась. Неспецифические явления отсутствовали (табл. 2).

На всех стадиях реакции стекла с ниточками во избежание испарения жидкостей накрывали такими же стеклами с лунками и помещали во влажные камеры.

Таблица 1

Результаты смешанной агглютинации и реакции абсорбции—элюции при исследовании антигенов системы АВ0

Несмотря на довольно значительную давность следов, агглютиногены А и В в крови групп А, В и АВ выявлялись отчетливо даже при наличии крови группы А со слабо выраженным агглютиногеном А (так называемый агглютиноген А₂).

Агглютиноген 0 в крови группы 0 и агглютиноген Н в крови группы В тоже постоянно поддавались обнаружению, но агглютинация иногда была слабой. Еще менее интенсивная агглютинация наблюдалась при исследовании агглютиногена Н в крови группы А со слабо выраженным агглютиногеном А и большим содержанием агглютиногена Н. В исследованных образцах крови группы А с сильно выраженным агглютиногеном А и группы АВ присутствие агглютиногена Н осталось недоказанным.

Замена сыворотки анти-0(Н) экстрактом из семян ракитника сидячелистного (Cytisus sessili-folius), содержащим лектин анти-Н, оказалась очень эффективной при выявлении агглютиногена 0 в крови группы 0. Для суждения о возможностях обнаружения этим экстрактом агглютиногена Н в крови групп А, В и АВ еще не получено достаточных данных.

Существование ряда изосерологических систем, разнообразие объектов судебномедицинской экспертизы вещественных доказательств и специфика судебномедицинского материала требуют разрешения многих вопросов в отношении методов смешанной агглютинации и абсорбции-элюции, что и будет служить предметом наших дальнейших исследований.

Таблица 2

Результаты абсорбции—элюции с пятнами крови 0, А, B и АВ

Выводы

1. Метод абсорбции—элюции в модификации Ueno заслуживает серьезного внимания и дальнейшей разработки, так как расширяет возможности определения групповой принадлежности крови в пятнах.
2. При помощи указанного метода можно обнаруживать агглютиногены в очень малых следах.
3. Реакция абсорбции—элюции весьма экономична по времени и по количеству расходуемых сывороток.
4. Для обнаружения агглютиногена 0 в крови группы 0 следует пользоваться экстрактом из семян ракитника сидячелистиого — Cytisus sessilifolius (другие растительные экстракты мы не испытывали).
5. Стандартные эритроциты наиболее целесообразно вводить в опыт в виде 0, 75% взвеси в физиологическом растворе.