no

Выявление спермина в пятнах спермы путем электрофореза на бумаге

/ Буреш Л.  // Судебно-медицинская экспертиза. — 1968 — №3. — С. 46-47.

Буреш Л. Выявление спермина в пятнах спермы путем электрофореза на бумаге

УДК 340.624.4:816.69-008.074

Л. Буреш

Криминалистический институт общественной безопасности ЧССР, Прага


Demonstration of Spermine in Seminal Stains by Paper Chromatography

Bures L.

ссылка на эту страницу

Идентификация семенных пятен путем обнаружения сперматозоидов не всегда удается. Ее нельзя осуществить в случаях азооспермии; иногда отрицательный результат исследования наблюдается при грубом механическом повреждении пятна.

В связи с этим в последнее время много работ посвящается методам доказательства присутствия спермы, не зависящим от обнаружения сперматозоидов. Наиболее специфичны те, которые основаны па выявлении спермина.

В литературе описан метод хроматографии в различных вариантах, но он сопряжен с разрушением фосфатной связи в спермине и с переводом спермина в растворитель. Хроматографирование занимает 2—6 часов (в зависимости от свойств хроматографической бумаги и буфера).

Мы стремились устранить необходимость извлечения спермина из пятна и по возможности сократить срок анализа. С этой целью применяли метод электрофореза на бумаге.

Методика

Вырезают часть пятна размером 10×3 мм. С ворсистого материала можно срезать ворсинки с подсохшей спермой. Если материал очень тонкий (женское белье), две вырезки указанных выше размеров накладывают друг на друга. Объект смачивают 0,5 н. раствором соляной кислоты и через 10 мин. помещают на стартовую линию на хроматографической бумаге Шлейхер — Шил 2043 b, заранее насыщенной электролитом, — им служит цитратный буфер pH 4,6: А. 0,1 М раствор лимонной кислоты (21,01 г на 1 л воды); Б. 0,1 М раствор цитрата натрия (29,41 г на 1 л воды).

Для приготовления буфера смешивают 255 мл раствора А и 245 мл раствора В, добавляя воду (до 1 л). Вода должна иметь нейтральную реакцию.

В качестве материала для сравнения пользовались смесью спермина (фирма Fluko и Busch, Швейцария) и холина (в виде холинхлорида). Оба вещества растворяют в 0,5 н. растворе соляной кислоты и наносят на стартовую линяю на хроматографической бумаге одновременно с исследуемым объектом. Место старта передвигают ближе к аноду, так как оба вещества мигрируют к катоду. Электофорез продолжают 30 мин. при 15 в/см (измеряют у фитиля1).

Полученную электрофореграмму высушивают и опрыскивают реактивом Драгендорфа. Реактив сохраняют на холоду в течение нескольких недель.

Спермин и холин образуют на электрофореграмма поперечные продолговатые зоны розово-оранжевого цвета. Если старт находится в 50 мм от фитиля (+), зона спермина появляется в 109 мм, а зона холина — в 120 мм от фитиля (по направлению к катоду). После побледнения желтоватой окраски от йода зона спермина приобретает розовый цвет и хорошо контурируется, а зона холина — фиолетовый цвет и становится расплывчатой.

Оценка результатов

Скорость миграции исследуемых веществ колеблется, так как соблюсти одинаковые условия электрофореза трудно. Это зависит от колебаний напряжения, от pH буфера и от расстояния стартовой линии от анода. Влияют на скорость миграции также температура и (косвенно) испарение воды. Повышение температуры на 1° увеличивает скорость миграции примерно на 3%. Испарение воды повышает концентрацию электролита, а тем самым — его проводимость и ионную силу. Бумага впитывает новую порцию раствора из электродных сосудов (так называемый фитильный эффект), в результате чего снижается напряжение тока. Имеют значение и другие факторы. Поэтому обязательно контрольное исследование смеси спермина и холина.

При определении изоэлектрической точки этих веществ установлено, что в указанных условиях спермин мигрирует максимально до 124 мм, а холин — до 138 мм от фитиля (+), несмотря на положение стартовой линии. Далее миграция равна нулю. Таким образом, с целью получения хотя бы приблизительно воспроизводимых результатов необходимо всегда соблюдать одинаковое расстояние стартовой линии от фитиля и анода (чтобы в процессе электрофореза миграция не достигала изоэлектрической точки) и относительно одинаковую насыщенность бумаги электролитом.

Приводимый метод, при котором можно пользоваться любой соответствующей аппаратурой, прост и быстро осуществим. Электрофорез не требует охлаждения. В зависимости от применяемого прибора напряжение можно снизить до 10 в/см, но тогда срок электрофореза удлиняется в 2—3 раза.

Мы испытывали методом электрофореза пятна выделений из влагалища, а также пятна слюны, пота, мочи, околоплодных вод и крови, но всегда получали отрицательный результат. При исследовании же пятен спермы, на которых находились указанные вещества, наличие спермина и холина всегда удавалось достоверно доказать.

 

1 Фитиль — полоска фильтровальной бумаги, соединяющая хроматографическую бумагу с электродным сосудом.

похожие материалы в каталогах

Обнаружение и исследование спермы

похожие статьи

О применении сока из клубней картофеля для обнаружения спермы на вещественных доказательствах / Тюрникова Ф.В. // Судебно-медицинская экспертиза. — 1968. — №2. — С. 27-28.

О реакции на сперму с соком из клубней картофеля / Инглез О.В. // Судебно-медицинская экспертиза. — 1968. — №1. — С. 49-51.

К вопросу о реакции человеческой спермы с картофельным соком / Барсегянц Л.О. // Судебно-медицинская экспертиза. — 1967. — №3. — С. 35-39.

Установление наличия и видовой принадлежности человеческой спермы при помощи некоторых растительных экстрактов / Барсегянц Л.О. // Судебно-медицинская экспертиза. — 1967. — №1. — С. 34-36.

Определение и экспертное значение изоферментов лактатдегидрогеназы в пятнах спермы / Шмехта Х., Порстман Т., Пикарт Х. // Судебно-медицинская экспертиза. — 1976. — №3. — С. 39-42.