Метод обезвоживания и заливки гистологического материала в парафин и окраска срезов с применением изопропилового спирта

По классической схеме обработки материала для гистологического исследования после одно - двух суточной фиксации кусочков в фиксирующей жидкости происходит обезвоживание их с помощью этилового спирта. Для этого кусочки помещают в этиловый спирт в возрастающей концентрации от 70% до 96% обычно по очереди, в 3-4 широкогорлых банках по 6-24 часа в каждой порции. После этого кусочки помещают на 1-3 часа в ксилол или другой растворитель, затем на 2-3 часа в расплавленный парафин.

В лучшем случае, при наличии автомата для гистологической обработки ткани, такая методика позволяет обработать материал за 3-5 суток.

Существуют ускоренные методы заливки материала в парафин с применением ацетона, сокращение количества банок спиртов для обезжиривания. Однако эти методы страдают рядом недостатков. В частности, ацетон требует применения маленьких кусочков размером 2-3 мм и очень сильно деформирует ткани; сокращенная длительность пребывания кусочков в спиртах улучшает качество диффузии парафина в них, что сказывается при резке проведенного материала на микротоме.

Нами был опробован в качестве заменителя этилового спирта концентрированный изопропиловый спирт, как технический, так и химически чистый.

Острой опасной бритвой аккуратно вырезанные из фиксированного материала кусочки, в виде тонких пластинок, толщиной 2-4 мм и площадью

1-2 см, промытые и слегка просушенные на фильтрованной бумаге, помещают в 4 порции изопропилового спирта на 1 час в каждую порцию; после этого кусочки переносят на 1 час в один из растворителей и переносят в расплавленный, нагретый в термостате до 57 С 0 парафин, 2 порции по 1 часу в каждой. Общая длительность обработки материала составляет 7 часов. При необходимости лаборант успевает в течении рабочего дня залить материал в парафин, порезать и покрасить его, а врач - исследовать под микроскопом.

Нами так же опробована методика исключения из проводки исследуемого материала сильно ядовитых веществ, таких как ксилол, толуол, бензол. Изопропиловый спирт легко смешивается с расплавленным парафином и это позволяет переносить материал непосредственно из изопропилового спирта в расплавленный парафин, не меняя времени экспозиции.

Характерным является то, что обрабатываемые кусочки становятся весьма пластичными, что позволяет делать серийные срезы толщиной 3-4 микрона каждый. Нам удавалось получить гистологический срез цельной почки новорожденного, прокрасить его, заключить в полистирол; при применении обычных методов подобных результатов добиться невозможно.

Изопропиловый спирт не является сильно действующим ядовитым веществом и более вредного влияния, чем этиловый спирт, на организм работающего с ним не оказывает.

Срезы тканей после проводки с применением изопропилового спирта хорошо воспринимают стандартные методы окраски, такие как гемотаксилин-эозин, окраску по методу Ван-Гизон.

В процессе окраски материала можно исключить применение этилового спирта, заменив его изопропиловым, не меняя времени экспозиции срезов в спирте и порядка окраски материала.

Данный метод, благодаря резкому увеличению скорости обработки материала, может быть применен для работы в гистологических отделениях.