Определение групп изосерологической системы P в высохшей крови (Сообщение II)

В 1966 г. отдел судебно-медицинского исследования вещественных доказательств располагал человеческой сывороткой анти-Р, которая находилась в жидком состоянии и содержала, по-видимому, нормальное антитело, так как наилучшим образом реагировала при низкой температуре (+4°).

При помощи этой сыворотки выяснено следующее:

• 1) агглютиноген Р поддается обнаружению в высохшей крови;
• 2) срок, прошедший с момента образования следов крови, оказывает большое влияние на показатели абсорбции — сильно выраженный агглютиноген Р достоверно выявлялся при довольно значительной (более 3 месяцев) давности пятен крови, а наличие слабо выраженного агглютиногена иногда оставалось недоказанным и в относительно свежих (7 дней) следах крови;
• 3) неблагоприятное воздействие на сыворотку анти-Р со стороны загрязненных материалов вещественных доказательств не выходило за пределы того, которое наблюдается в отношении других гемагглютинирующих сывороток (М.А. Бронникова, В.А. Багдасаров, Л.О. Барсегянц Определение групп изосерологической системы Р в высохшей крови. Советская антропология, 1958, №: 1.).

В 1957 г. была получена высушенная сыворотка анти-Р животного, которая проявляла свое действие преимущественно при температуре 18,-20°.

Поскольку агглютиноген Р в крови человека может быть выражен сильно, умеренно или слабо, мы поставили перед собой две задачи:

• 1) установить, какая агглютинабильность эритроцитов группы Р является наиболее распространенной;
• 2) как различная степень атглютинационной способности эритроцитов отражается на выявлении агглюти- ногена Р в высохшей крови.

Материалом для исследования служила кровь 61 донора. Одну порцию крови каждого из них подвергали исследованию в жидком виде, а из другой — изготовляли пятна на заранее проверенной марле. Сыворотку анти-Р перед применением растворяли в специальной жидкости неизвестного состава, присланной вместе с сывороткой: к содержимому одной ампулы добавляли 1 мл растворителя.

С целью определения агглютинабильности эритроцитов сыворотку анти-Р разводили в пробирках в геометрической прогрессии от 2 до 256 раз. К капле сыворотки во всех разведениях добавляли по капле 2% взвеси исследуемых эритроцитов. Ингредиенты смешивалй легким встряхиванием пробирок и смеси оставляли на 1 час при температуре 18—20°. По истечении этого срока пробирки энергично Таблица 1 встряхивали В штативе И агглютинабильность эритроцитов Р+ глютинацию наблюдали с 7-кратной лупой; содержимое тех пробирок, в которых склеивания эритроцитов не наблюдалось, переносили на предметные стекла и рассматривали под микроскопом (под покровными стеклами) (табл. 1).

Таблица 1
Агглютинабильность эритроцитов Р+

Из приведенных данных следует, что наиболее распространенными показателями агглютинабильности эритроцитов крови группы Р являются 1:64 и 1:32. Несколько более высокая (1:128) и низкая (1:16) степень агглютинационной способности эритроцитов отмечалась в относительно небольшом количестве случаев. Весьма слабая агглютинабильность эритроцитов (1:4 и 1:2) имела место в крови малого числа лиц. Агглютиноген Р не был обнаружен в крови 6 человек.

Пятна крови на марле высушивали при комнатной температуре и хранили в отдельных бумажных пакетах в темном сухом месте. Агглютиноген Р выявляли при помощи реакции абсорбции в количественной модификации.

Перед проведением основных опытов выяснялся вопрос о том, какую высоту титра сыворотки анти-Р следует считать оптимальной для этой реакции.

Учитывая показатели агглютинабильности эритроцитов группы Р, по аналогии с данными, имеющимися в отношении сывороток β, α, анти-В и анти-А, можно было полагать, что для сыворотки анти-Р (при обнаружении агглютиногена Р в высохшей крови) средним оптимальным окажется титр 1:32.

Однако результаты соответствующих опытов не подтвердили изложенного выше предположения: титр сыворотки 1:32 не обеспечивал достоверного обнаружения агглютиногена Р даже в тех образцах высушенной крови, в которых агглютинабильность эритроцитов была достаточно высока (1 :64). Наблюдалось лишь незначительное снижение исходного титра сыворотки: ослабление ее почти во всех разведениях и отсутствие агглютинации в 1—2 наибольших разведениях. Поэтому для реакции абсорбции сыворотка анти-Р использовалась в титре 1:7, 1:8, 1:10, 1:14 или 1:16.

Основные опыты заключались в определении группы Р в высохшей крови различных доноров, причем каждый образец крови, полученный от того или иного донора, подвергался исследованию в первые 2—3 дня и через 1 — 1 1/2 месяца после изготовления пятна. Отдельные образцы, кроме того, испытывались еще и в иные сроки: через 2 недели, 4 1/3 месяцами 2 года с лишним (2 года 2 месяца и 2 года 4 месяца). Всего проведены 172 отдельные реакции абсорбции.

Из пятен крови и контрольной марли, измельченных ножницами, делали навески по 60 мг. К этим навескам добавляли сыворотку анти-Р в объеме 0,25 мл. Ингредиенты смешивали и помещали в рефрижератор при температуре +4° на 18—22 часа. По истечении указанного срока абсорбированную сыворотку отсасывали пастеровскими пипетками, центрифугировали и подвергали развернутому титрованию (в смежных разведениях.) в пробирках, добавляя к капле сыворотки каплю 2% взвеси стандартных эритроцитов ОР+. Смеси оставляли на 1 час при температуре 118—20°, энергично встряхивали пробирки в штативе и учитывали результаты реакции абсорбции путем наблюдения агглютинации с 7-кратной лупой и под микроскопом.

С целью контролирования получаемых данных всегда одновременно титровали исходную сыворотку и сыворотку, находившуюся в контакте с пятном P-отрицательной крови, а также испытывали сыворотку анти-Р в рабочем разведении для реакции абсорбции стандартными эритроцитами Р — (проверка специфичности).

Прежде всего кровь 59 доноров (из них 53 являлись Р-положительными: и 6 P-отрицательными) исследовали с целью обнаружения агглютиногена Р в пятнах давностью 2—3 дня. Агглютиноген Р был выявлен в 52, образцах крови Р+, в которых агглютинационная способность: эритроцитов варьировала от 1:2 до 1:128. Степень абсорбции выражалась в 3—11 ступенях поглощения, причем показатели абсорбции находились в определенной зависимости от агглютинабильности эритроцитов: чем выше была последняя, тем сильнее снижался титр сыворотки анти-Р. В одном пятне P-положительной крови с очень низкой агглютинационной способностью эритроцитов (1:2) агглютиноген Р обнаружен не был (табл. 2).

Таблица 2

Результаты реакции абсорбции при давности пятен крови 2—3 дня

Р-отрицательная кровь в пятнах либо совсем не снижала первоначальный титр сыворотки анти-Р, либо ослабляла его на 1—2 ступени поглощения и лишь в одном случае — на 3 ступени.

Подвергали исследованию 16 образцов крови в пятнах 2-недельной давности: агглютинабильность эритроцитов 2 из них была равна 1 : 128, 4 — 1 : 64, 2 — 1 : 32, 6—1: 16, 1 — 1:4; 4 образца крови являлись P-отрицательными. Агглютиноген Р обнаружен в крови 11 Р-положительных лиц (из 12). Абсорбционная способность агглютиногена Р колебалась от 4 до 8 ступеней поглощения. В одном образце крови этот агглютиноген не мог счи таться выявленным, так как исходный титр сыворотки оказался сниженным лишь на 2 ступени поглощения.

В данном случае тоже наблюдалась зависимость показателей абсорбции от агглютинабильности эритроцитов (табл. 3).

После взаимодействия сыворотки анти-Р с кровью Р— наблюдалось незначительное снижение ее титра (1—2 ступени поглощения).

Пятна крови 56 доноров исследовали после хранения в пределах 1—Р/а месяцев. Из числа этих образцов крови 50 содержали агглютиноген Р, причем агглютинационная способность эритроцитов у 6 доноров являлась равной 1 :128, у 16 — 1 : 64, у 16—1 : 32, у 6—1 : 16, у 3—1 : 4 и у 3—1 : 2. >5 образцов крови являлись Р-отрицательными.

Агглютиноген Р был выявлен в крови 44 Р-положительных лиц (из 50). Абсорбционная способность выражалась в 4—в ступенях поглощения. Необнаружение этого агглютиногена (Г—2 ступени поглощения) имело место в случаях низкой агглютинабильности эритроцитов (1:16—один образец крови, 1:4—два, 1:2—три).

При проведении данных опытов также отмечалась некоторая зависимость между показателями абсорбции агглютинина анти-Р и агглютинационной способностью эритроцитов (табл. 4).

Таблица 3

Результаты реакции абсорбции при давности пятен крови 14 дней

Таблица 4

Результаты реакции абсорбции при давности пятен крови 1—1 1/2 месяца

Таблица 5

Суммарные результаты реакции абсорбции

Кровь P-отрицательных доноров снижала исходный титр сыворотки анти-Р на 1—2 ступени поглощения и только один раз ослабила его на 3 ступени.

Суммарные данные в отношении исследования крови 50 человек в пятнах давностью 2—3 дня и 1—1 2/2 месяца представлены в табл. 5.

Шесть образцов крови испытывались после хранения пятен в течение 4 1/2 месяцев.

В крови трех лиц P-принадлежность была отчетливо установлена (5 и 7 ступеней поглощения при агглютинационной способности эритроцитов 1 : 64 и 4 ступени — при агглютинабильности эритроцитов 1 :32). В одном образце крови, когда агглютинационная способность эритроцитов равнялась 1 : 16, агглютиноген Р не мог считаться выявленным, так как снижение исходного титра сыворотки анти-Р выразилось лишь в одной ступени поглащения. То же относилось и к крови донора, агглютинабильность
эритроцитов которого была 1:2 (в этом случае не наблюдалось абсорбции агглютинина анти-Р даже в наибольшем разведении сыворотки). P-отрицательная кровь не связывала агглютинин анти-Р.

И, наконец, 5 образцов крови подвергались исследованию после хранения пятен в течение 2 с лишним лет (2 года 2 месяца и 2 года 4 месяца). В крови 4 доноров присутствие агглютиногена Р доказано с полной достоверностью (4 и 5 ступеней поглощения) при агглютинационной способности эритроцитов 1: 64 (в 3 случаях) и 1 :32 (в одном случае). В одном образце крови с агглютинабильностью эритроцитов 1 : Э2 агглютиноген-Р обнаружен не был (две ступени поглощения).

Контрольная марля никогда не снижала титр сыворотки анти-Р.

Выводы

1. Наиболее распространенными показателями агглютинационной способности эритроцитов группы Р являются 1 : '64 и 1 : 32. Слабо выраженный агглютиноген Р (агглютинабильность эритроцитов 1 : 4 и 1:2) имеется в небольшом количестве образцов крови (6 случаев из 61 в нашем материале). То же следует отнести и к агглютинационной способности, равной 1 : 128 и 1 : 16 (7 и 6 и з 61).
2. Возможность обнаружения агглютиногена Р в высохшей крови и устойчивость его в зависимости от фактора времени обусловливаются титром этого агглютиногена, отражающимся в агглютинабильности эритроцитов.
   • а) При показателях агглютинационной способности эритроцитов  1 : 128, 1 : 64 и 1 :32 агглютиноген Р отчетливо выявлялся не талька в свежих пятнах крови, но и в следах ее давностью 1 —1 1/2 месяца.
   • б) Агглютинабильность эритроцитов крови группы Р 1 : 16 и 1:4 обеспечивала обнаружение агглютиногена Р в свежих пятнах крови.
     
     В следах крови давностью 1 — 1 1 /2 месяца этот агглютиноген иногда не был выявлен i ( b меньшем количестве случаев при агглютинационной способности эритроцитов 1 : 16 и в большем — при агглютинабильности 1:4).
   • в) Агглютинационная способность эритроцитов группы Р 1 : 2 является недостаточной для постоянного обнаружения агглютиногена Р в высохшей крови даже при условии незначительной давности ее. При более длительном хранении пятен крови (1 — 1 1 /2 месяца) наличие слабо выраженного агглютиногена Р становится недоказуемым.
3. Установление групп изосерологической системы Р может иметь существенное значение для судебномедицинской экспертизы вещественных доказательств при разрешении вопроса о возможности происхождения крови от определенного лица.
4. Зависимость абсорбционных свойств и устойчивости агглютиногена Р от его титра влечет за собой необходимость определения агглютинабильности эритроцитов крови потерпевших и обвиняемых перед исследованием пятен крови на вещественных доказательствах.
5. Выводы в отношении P-принадлежности крови в следах на вещественных доказательствах могут быть сделаны только при положительном результате исследования, т. е. в случае достоверного обнаружения агглютиногена Р.
6. При использовании стандартных сывороток анти-Р в судебно-медицинской практике следует иметь в виду, что происхождение этих сывороток (от человека или животного) может оказывать значительное влияние на степень абсорбции агглютинина анти-Р агглютиногеном Р крови.