К вопросу о методике обнаружения агглютиногенов в высохшей крови некоторыми сыворотками, содержащими неполные антитела

Исследования проводились в отношении агглютиногена Келл. В стандартной сыворотке анти-Келл низкого титра (серия № 492 004) имелись неполные антитела типа агглютиноидов.

Реакция состояла из трех фаз. Первая представляла собой абсорбцию, в процессе которой происходило взаимодействие между агглютино- геном крови в пятне и сывороткой анти-Келл. К навескам в 50 мг марли, пропитанной Келл-положительной и Келл-отрицательной кровью, и к таким же навескам контрольного участка марли (в некоторых опытах чистую марлю брали не по весу, а по площади пятна крови) добавляли по 0,26 мл сыворотки анти-Келл в неразведенном виде. Ингредиенты смешивали и инкубировали в термостате при температуре 37° в течение 2 часов. Абсорбированные сыворотки отсасывали от материала и центрифугировали. .

Далее следовала вторая фаза—первый этап непрямой антиглобулиновой пробы Кумбса, при котором должна была наступать сенсибилизация эритроцитов, содержащих агглютиноген Келл, т. е. специфическое обволакивание эритроцитов агглютиноидом анти-Келл. К двум каплям каждой абсорбированной и исходной сыворотки добавляли Келл-лоложительные эритроциты, к двум другим каплям тех же объектов — Келл-отрицательные эритроциты (для контроля). С этой целью незначительное количество дважды отмытых эритроцитов наносили на дно агглютинанионных пробирок путем прикосновения к нему капиллярной частью пастеровских пипеток с эритроцитной массой, после чего прибавляли сыворотку. Содержимое пробирок осторожно смешивали легким встряхиванием и снова инкубировали 2 часа в термостате при температуре 37°.

По истечении указанного срока эритроциты, имевшиеся во всех пробирках, 3 раза отмывали физиологическим раствором.

В третьей фазе реакции, соответствующей второму этапу пробы Кумбса, выясняли наличие или отсутствие сенсибилизации эритроцитов.

Для этого их переносили пастеровскими пипетками на предметные стекла и добавляли антиглобулиновую сыворотку. Реакцию агглютинации наблюдали с 7-кратной лупой при сильном электрическом освещении, через 3, 6, 9 и 12 минут, а затем препараты рассматривали под микроскопом (см. схему).

Если в пятне была Келл-положительная кровь, то в первой фазе реакции агглютиноген Келл связывал агглютиноид анти-Келл. В силу этого абсорбированная сыворотка утрачивала способность сенсибилизировать Келл-положительные эритроциты во второй фазе опыта. Поскольку на поверхности эритроцитов глобулина не оказывалось, в третьей фазе реакции антиглобулиновая сыворотка не могла вызвать их агглютинации.

Определение агглютиногена Kелл в пятнах крови

При наличии в пятне Келл-отрицательной крови в процессе первой фазы опыта агглютиноид анти-Келл оставался в сыворотке после контакта ее с исследуемой кровью. Такая сыворотка во второй фазе реакции сенсибилизировала Келл-положительные эритроциты. Благодаря присутствию на эритроцитах специфически фиксированного глобулина они в третьей фазе опыта агглютинировались антиглобулиновой сывороткой.

Контрольные Келл-отрицательные эритроциты не сенсибилизировались исходной и абсорбированной сывороткой анти-Келл и потому никогда не склеивались антиглобулиновой сывороткой.

При помощи изложенного метода нам удалось обнаружить агглютиноген Келл в пятнах крови однодневной давности (см. таблицу). В следах крови, хранившихся 7 дней, этот агглютиноген при указанных условиях уже полностью не связывал агглютиноид анти-Келл; наблюдалось лишь некоторое ослабление действия абсорбированной сыворотки.

Таким образом, было доказано, что агглютиногены в высохшей крови можно выявлять не только сыворотками, содержащими полные антитела-агглютинины, но и некоторыми сыворотками, в которых имеются неполные антитела типа агглютиноидов.