К вопросу консервации биологических объектов для биохимических исследований

В настоящее время биохимические исследования трупного материала широко используются для решения актуальных задач судебно-медицинской практики. Однако на результаты таких исследований существенное влияние оказывают различные факторы: длительность агонии, трупный аутолиз, региональные особенности крови, время изъятия биоматериала после смерти и условия его хранения, а также сроки доставки биоматериала. Известно, что в судебно-медицинской практике в качестве консерванта трупного биоматериала рекомендуется применение глицерина, 70 % раствор этилового спирта, а также заморозка. Однако в научной литературе отсутствуют сведения о влиянии этих методов консервации на результаты биохимических исследований и их достоверность. Таким образом, вопрос консервации биообъектов с целью проведения отсроченных судебно-биохимических исследований весьма актуален и требует своего разрешения.

Для определения допустимых способов консервации биоматериала нами было проведено исследование трупных тканей печени, миокарда, скелетной мышцы на содержание гликогена (антроновый метод) под воздействием

5 % и 10 % формалина, глицерина 70 %, смеси 70 % глицерина и 70 % этанола в равных объемах (1:1), 40 % этанола, 96 % этанола, а также при однократном замораживании тканей при -18 °С в сроки 48 ч, 7 и 10 дней. Предварительно во фрагментах тканей было проведено определение содержания гликогена антроновым методом по Зейфтеру в модификации Эйдельмана (стартовые результаты).

Нами установлено, что при консервации 5 % и 10 % раствором формалина все ткани уплотнились и приобрели серый цвет. Через 48 ч во всех изучаемых биообъектах гликоген отсутствовал, и поэтому дальнейшие биохимические исследования с этим консервантом не производились. При визуальном осмотре фрагментов тканей печени, миокарда и скелетной мышцы, подвергнутых консервации с помощью 96 % этанола, было обнаружено «усыхание» объектов, что препятствовало дальнейшему их исследованию.

Результаты исследований содержания гликогена в печени, миокарде и скелетной мышце при консервации биообъектов в течение 48 ч спиртовыми растворами (глицерин 70 %, 70 % глицерин + 70 % этанол в равных объемах (1:1), 40 % этанол) показали исчезновение резервных углеводов в скелетной мышце и миокарде, а в печени – их снижение в среднем на 36 %, что послужило основанием для продления опыта только с этим объектом. Однако нами установлено, что через 7 и 10 дней после консервации содержание гликогена в печени значительно снизилось, причем ткани, находящиеся в растворе глицерина, были «задублены» и непригодны для исследования, что свидетельствует о непригодности глицерина в качестве консерванта.

В то же время при хранении фрагментов ткани печени, миокарда и скелетной мышцы при температуре -18 °С в сроки 48 ч, 7 и 10 дней колебание концентрации резервных углеводов было незначительным (в пределах 9 %), наиболее выраженное в печени, что может быть связано с погрешностями метода и неоднородностью исследуемых кусочков трупной ткани. Значимые отклонения от исходной концентрации были выявлены при исследовании гликогена через 10 дней после консервации холодом.

Таким образом, результаты, полученные в ходе проведения настоящего эксперимента, свидетельствуют, что для проведения отсроченных биохимических исследований целесообразным является лишь однократное замораживание тканей при температуре не ниже -18 °С сроком до 7 дней, а использование иных методов консервации тканей недопустимо.