Использование метода ферментативного гидролиза для изолирования производных барбитуровой кислоты из крови (на примере фенобарбитала и барбамила)

/ Чувина Н.А. Колупаева А.С. Стрелова О.Ю. Заблоцкая И.В. Горбачева Т.В.  // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 2010 — №5. — С. 19-21.

Чувина Н.А., Колупаева А.С., Стрелова О.Ю., Заблоцкая И.В., Горбачева Т.В. Использование метода ферментативного гидролиза для изолирования производных барбитуровой кислоты из крови (на примере фенобарбитала и барбамила)

Асп. Н.А. ЧУВИНА1, врач А.С. КОЛУПАЕВА1, доц. О.Ю. СТРЕЛОВА1, врач-эксп. И.В. ЗАБЛОЦКАЯ2, врач-эксп. Т.В. ГОРБАЧЕВА2

1Кафедра фармацевтической химии (зав. — проф. Р.Е. Трифонов), 2ГУЗ Санкт-Петербурга «БСМЭ», (нач. — проф. Г.П. Лаврентюк)

Методы изолирования прямой экстракцией органическими растворителями или после осаждения белков различными осадительными или высаливающими агентами малоэффективны и не позволяют выделить производные барбитуровой кислоты из их комплекса с белками крови. Применение ферментативного гидролиза позволяет разрушить связь барбитуратов с белками и повысить эффективность изолирования. Проводили гидролиз с использованием ферментов трипсин, пепсин, химотрипсин и папаин модельных комплексов фенобарбитал—кровь и барбамил—кровь. Степень экстракции фенобарбитала составила при использовании трипсина 62,1±1,2%, барбамила — 75,1±1,6%. Увеличение степени экстракции по сравнению с таковой при использовании традиционных методов составило для фенобарбитала 32,7±1,0%, для барбамила 51,1±1,0%. Для предлагаемой методики определены некоторые валидационные характеристики.

Ключевые слова: производные барбитуровой кислоты, фенобарбитал, барбамил, ферментативный гидролиз, трипсин, пепсин, химотрипсин, папаин, кровь, количественное определение, высокоэффективная жидкостная хроматография, валидация.

 

The use of enzymatic hydrolysis for isolation of barbituric acid derivatives from blood (as exemplified by phenobarbital and barbamyl)

N.A. CHUVINA, A.S. KOLUPAEVA, O.YU. STRELOVA, I.V. ZABLOTSKAYA, T.V. GORBACHEVA  

Modern isolation techniques by direct extraction with organic solvents or after protein precipitation by various sedimenting or salting-out agents are characterized by low efficiency and do not permit to liberate derivatives of barbituric acid from their complexes with blood proteins. The use of enzymatic hydrolysis makes it possible to break bonds between barbiturates and protein and thereby improve the efficiency of isolation. We performed enzymatic hydrolysis of the model phenobarbital-blood and barbamyl-blood complexes with the use of trypsin, pepsin, chymotrypsin, and papain. The degree of phenobarbital extraction with trypsin and barbamyl was estimated at 62,1±1,2% and 75,1±1,6% respectively; in other words, it was 32,7±1,0% and 51,1±1,0% higher than that achieved by traditional methods. Certain validation characteristics of the new method are presented.

Key words: derivatives of barbituric acid, phenobarbital, barbamyl, enzymatic hydrolysis, trypsin, pepsin, chymotrypsin, papain, blood, quantitative determination, high performance liquid chromatography, validation.

ссылка на эту страницу

похожие материалы в каталогах

Судебно-химические исследования

похожие статьи

Состояние и перспективы исследования цитомединов печени / Авдохиев Г.И., Кузьмина О.В., Кот М.Л. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 43-44.

К вопросу об анализе фосфорорганических пестицидов методом ТСХ / Горбачева Н.А. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 145-146.

Проблемные аспекты химикотоксикологического исследования психоактивных веществ / Клименко Т.В., Клевно В.А., Максимов А.В. // Судебная медицина. — 2018. — №4. — С. 36-40.

Установление наличия кала в следах на вещественных доказательствах методом восходящей тонкослойной хроматографии / Четвертнова А.П., Федоровцев А.Л., Эделев Н.С. // Судебная медицина. — 2018. — №4. — С. 30-32.

Влияние давности и температуры хранения трупной крови на показатели веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) / Эделев И.С. // Вестник судебной медицины. — Новосибирск, 2018. — №3. — С. 15-18.