О выявлении антигонов АВО в окрашенных гистологических срезах реакциями абсорбции — элюции и смешанной агглютинации. Предварительное сообщение

/ Ревнитская Л.А. Колыш М.Ш.  // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1974 — №3. — С. 17-19.

Ревнитская Л.А., Колыш М.Ш. О выявлении антигонов АВО в окрашенных гистологических срезах реакциями абсорбции — элюции и смешанной агглютинации. Предварительное сообщение

УДК 340.624.41:612.118.221.2

Кафедра судебной медицины (зав. — проф. А.П. Загрядская) Горьковского медицинского института им. С.М. Кирова

О выявлении антигонов АВО в окрашенных гистологических срезах реакциями абсорбции — элюции и смешанной агглютинации. Предварительное сообщение. Ревнитская Л.А., Колыш М.Ш. Суд.-мед. эксперт., 1974, № 3, с. 17.

Исследованиями окрашенных гистологических препаратов ткани селезенки подтверждена возможность обнаружения в них антигенов АВО. Установлены некоторые преимущества реакции смешанной агглютинации по сравнению с реакцией абсорбции — элюции.

 

DEMONSTRATION OF ABO ANTIGENS IN STAINED HISTOLOGICAL SECTIONS BY ABSORPTION — ELUTION AND MIXED AGGLUTINATION TESTS. PRELIMINARY REPORT

L. A. Revnitskaya, M. Sh. Kolysh

A study of spleen tissue confirmed the possibility of ABO grouping. Some advantages of mixed agglutination as compared with absorption-elution test were demonstrated. The method may be a useful tool in cases of grouping body particles adherent to cold weapons when the material is available only in the form of histological sections prepared for the identifying of organs and tissues. Further studies are in course.

ссылка на эту страницу

На орудиях механической травмы иногда обнаруживаются элементы поврежденных тканей тела. В процессе установления их органотканевой принадлежности изготовляют гистологические среды, на которые

нередко расходуют весь материал. В таких случаях возникает вопрос о возможности выявления в окрашенных препаратах изосерологических факторов для определения групповой принадлежности клеток.

Slavik и Meluzin (1972) обнаруживали методом элюции группоспецифические антигены А, В и 0 в окрашенных гистологических срезах.

Мы тоже провели соответствующее исследование. Материалом служила ткань селезенки, взятая вскоре после насильственной смерти из трупов без каких-либо болезненных изменений внутренних органов.

Препараты готовили на замораживающем микротоме после формалиновой фиксации в течение 2—8 сут, окрашивали гематоксилин-эозином и заключали в полистирол. Контролем служила кровь из трупов и ткань селезенки, не подвергавшаяся гистологической обработке.

Препараты помещали в ксилол для удаления полистирола. После освобождения среза от стекол (предметного и покровного) его размельчали, отмывали ксилолом, ресуспендировали в ксилоле и из полученной взвеси готовили мазки, высушивали на воздухе, фиксировали метанолом 10 мин. Антигены А и В выявляли реакциями смешанной агглютинации и абсорбции — элюции. Абсорбция протекала в холодильнике при 4° и при комнатной температуре. Применяли изогемагглютинирующие сыворотки альфа, бета и иммунные анти-А, анти-В с титром 1:256. Избыток антител удаляли отмыванием физиологическим раствором хлористого натрия в течение 1,5 ч, после чего добавляли 0,2% взвесь стандартных эритроцитов. Результаты учитывали через 1,5—2 ч при фазово-контрастной микроскопии (ув. 125—250×) по 3-балльной системе. На протяжении исследования препараты сохраняли во влажной камере. Всего поставили 62 опыта 4 серий.

В I серии проверяли возможность выявления агглютиногенов А и В в свежих гистологических препаратах и спустя некоторое время после их изготовления. Исследовали 22 препарата группы А, 4 — группы В, приготовленных в тот же день; 8 образцов группы А и 2 группы В — на 2-й день; 10 образцов группы А — на 5-й день; 9 образцов группы А — на 10-й день и 8 образцов группы В — через 1 мес со дня изготовления препаратов. В свежих срезах (в день изготовления) полистирол хорошо растворялся в ксилоле, в препаратах отмечалось большое количество отдельных клеток. С увеличением давности препарата растворимость ухудшалась (необходимое для этого время увеличивалось до 48 ч), клетки при ресуспензировании меняли форму, встречались их обломки. Часто оставались конгломераты клеток и тогда наблюдалось усиленное прилипание эритроцитов к предметному стеклу и неспецифические результаты (возможно, из-за неполного удаления полистирола).

Во II серии опытов определяли влияние способа фиксации клеток к предметному стеклу. Параллельно исследовали 8 образцов на стеклах, обработанных лишь смесью Никифорова, и 8 — на стеклах, обработанных белок-глицерином. Какой-либо зависимости результатов реакции абсорбции — элюции и смешанной агглютинации от способа фиксации не отмечено: в препаратах всегда было достаточное количество фиксированных клеток, пригодных для исследования.

Далее выбирали условия абсорбции. Исследовали параллельно 6 образцов. Препараты помещали на 15 ч либо в рефрижератор при 4°, либо оставляли при комнатной температуре. Более четко антигены выявлялись при проведении абсорбции в холодильнике.

В IV серии изучали возможность обнаружения антигенов А и В в гистологических препаратах без их предварительного растирания, но с отмыванием ксилолом.

Во всех случаях отмечено усиленное прилипание эритроцитов к предметному стеклу и неспецифическая агглютинация.

Как отмечено выше, в качестве стандартных эритроцитов группы А и В применяли 0,2% взвесь в физиологическом растворе хлористого натрия. В 6 опытах для усиления агглютинации к взвеси стандартных эритроцитов добавляли бычий альбумин. При этом, кроме усиления агглютинации, отмечали неспецифические явления, т. е. связывание разноименных антигенов.

Во всех 4 сериях опытов параллельно с решением указанных вопросов проводили сравнительную оценку реакций абсорбции — элюции и смешанной агглютинации. Установлено, что в реакции абсорбции — элюции отсутствует фаза элюции, а сама реакция идет по типу смешанной агглютинации с отчетливо выраженным положительным результатом.

Время фиксации трупного материала не отражалось на выявлении антигенов А и В.

Таким образом, подтверждена принципиальная возможность обнаружения антигенов АВО в гистологически обработанных окрашенных срезах. Это имеет большое значение в аспекте установления групповой принадлежности элементов животных тканей, выявляемых на орудиях механической травмы при ограниченном количестве материала, пригодного для изучения. Антигены легко обнаруживались реакцией смешанной агглютинации, по типу ее протекала и реакция абсорбции — элюции.

Исследования в этом направлении продолжаются.

похожие материалы в каталогах

Судебно-биологические исследования

похожие статьи

К вопросу об использовании макроглобулинов крови человека при судебно-медицинском исследовании трупа / Яковлев Д.Ю. // Вестник судебной медицины. — Новосибирск, 2018. — №4. — С. 16-18.

К анализу и интерпретации результатов при установлении видовой принадлежности биологических объектов (случай из практики) / Кулясова Н.А., Недолуга Н.О. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2018. — №17. — С. 143-145.

Дифференциация в смешанных пятнах антигена А выделений от антигена А крови при помощи лектина / Потапов М.И. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №3. — С. 21-26.

Сравнительное исследование антигенов системы АВ0 в слюне, сперме и в секрете влагалища / Масис Т.М. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №2. — С. 21-27.

Выявление в сыворотках крови людей антител к антигенам системы Gm / Резникова М.Н., Баринова Л.И., Соловьева Н.А., Башлай А.Г., Моргулис Н.Б. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №1. — С. 35-38.