О выявлении антигонов АВО в окрашенных гистологических срезах реакциями абсорбции — элюции и смешанной агглютинации. Предварительное сообщение

На орудиях механической травмы иногда обнаруживаются элементы поврежденных тканей тела. В процессе установления их органотканевой принадлежности изготовляют гистологические среды, на которые

нередко расходуют весь материал. В таких случаях возникает вопрос о возможности выявления в окрашенных препаратах изосерологических факторов для определения групповой принадлежности клеток.

Slavik и Meluzin (1972) обнаруживали методом элюции группоспецифические антигены А, В и 0 в окрашенных гистологических срезах.

Мы тоже провели соответствующее исследование. Материалом служила ткань селезенки, взятая вскоре после насильственной смерти из трупов без каких-либо болезненных изменений внутренних органов.

Препараты готовили на замораживающем микротоме после формалиновой фиксации в течение 2—8 сут, окрашивали гематоксилин-эозином и заключали в полистирол. Контролем служила кровь из трупов и ткань селезенки, не подвергавшаяся гистологической обработке.

Препараты помещали в ксилол для удаления полистирола. После освобождения среза от стекол (предметного и покровного) его размельчали, отмывали ксилолом, ресуспендировали в ксилоле и из полученной взвеси готовили мазки, высушивали на воздухе, фиксировали метанолом 10 мин. Антигены А и В выявляли реакциями смешанной агглютинации и абсорбции — элюции. Абсорбция протекала в холодильнике при 4° и при комнатной температуре. Применяли изогемагглютинирующие сыворотки альфа, бета и иммунные анти-А, анти-В с титром 1:256. Избыток антител удаляли отмыванием физиологическим раствором хлористого натрия в течение 1,5 ч, после чего добавляли 0,2% взвесь стандартных эритроцитов. Результаты учитывали через 1,5—2 ч при фазово-контрастной микроскопии (ув. 125—250×) по 3-балльной системе. На протяжении исследования препараты сохраняли во влажной камере. Всего поставили 62 опыта 4 серий.

В I серии проверяли возможность выявления агглютиногенов А и В в свежих гистологических препаратах и спустя некоторое время после их изготовления. Исследовали 22 препарата группы А, 4 — группы В, приготовленных в тот же день; 8 образцов группы А и 2 группы В — на 2-й день; 10 образцов группы А — на 5-й день; 9 образцов группы А — на 10-й день и 8 образцов группы В — через 1 мес со дня изготовления препаратов. В свежих срезах (в день изготовления) полистирол хорошо растворялся в ксилоле, в препаратах отмечалось большое количество отдельных клеток. С увеличением давности препарата растворимость ухудшалась (необходимое для этого время увеличивалось до 48 ч), клетки при ресуспензировании меняли форму, встречались их обломки. Часто оставались конгломераты клеток и тогда наблюдалось усиленное прилипание эритроцитов к предметному стеклу и неспецифические результаты (возможно, из-за неполного удаления полистирола).

Во II серии опытов определяли влияние способа фиксации клеток к предметному стеклу. Параллельно исследовали 8 образцов на стеклах, обработанных лишь смесью Никифорова, и 8 — на стеклах, обработанных белок-глицерином. Какой-либо зависимости результатов реакции абсорбции — элюции и смешанной агглютинации от способа фиксации не отмечено: в препаратах всегда было достаточное количество фиксированных клеток, пригодных для исследования.

Далее выбирали условия абсорбции. Исследовали параллельно 6 образцов. Препараты помещали на 15 ч либо в рефрижератор при 4°, либо оставляли при комнатной температуре. Более четко антигены выявлялись при проведении абсорбции в холодильнике.

В IV серии изучали возможность обнаружения антигенов А и В в гистологических препаратах без их предварительного растирания, но с отмыванием ксилолом.

Во всех случаях отмечено усиленное прилипание эритроцитов к предметному стеклу и неспецифическая агглютинация.

Как отмечено выше, в качестве стандартных эритроцитов группы А и В применяли 0,2% взвесь в физиологическом растворе хлористого натрия. В 6 опытах для усиления агглютинации к взвеси стандартных эритроцитов добавляли бычий альбумин. При этом, кроме усиления агглютинации, отмечали неспецифические явления, т. е. связывание разноименных антигенов.

Во всех 4 сериях опытов параллельно с решением указанных вопросов проводили сравнительную оценку реакций абсорбции — элюции и смешанной агглютинации. Установлено, что в реакции абсорбции — элюции отсутствует фаза элюции, а сама реакция идет по типу смешанной агглютинации с отчетливо выраженным положительным результатом.

Время фиксации трупного материала не отражалось на выявлении антигенов А и В.

Таким образом, подтверждена принципиальная возможность обнаружения антигенов АВО в гистологически обработанных окрашенных срезах. Это имеет большое значение в аспекте установления групповой принадлежности элементов животных тканей, выявляемых на орудиях механической травмы при ограниченном количестве материала, пригодного для изучения. Антигены легко обнаруживались реакцией смешанной агглютинации, по типу ее протекала и реакция абсорбции — элюции.

Исследования в этом направлении продолжаются.