Сравнительная оценка методов изолирования эхинопсина из биологического материала

/ Вайнаускас П.В.  // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1975 — №1. — С. 29-30.

Вайнаускас П.В. Сравнительная оценка методов изолирования эхинопсина из биологического материала

Кафедра токсикологической и аналитической химии (зав. — проф. В.Ф. Крамаренко) Львовского медицинского института

УДК 340.67:615.216.6:547.94].099

 

COMPARATIVE ASSESSMENT OF METHODS OF ISOLATING ECHINOPSINUM

FROM BIOLOGICAL MATTER

P. V. Vaynauskas

Five methods of isolation were tested. Optimal results were obtained using water acidated with oxalic acid (A. A. Vasilyeva), water acidated with sulphuric acid (V. F. Kramarenko), water acidated with trichloracetic acid, and by Grusz-Hardy technique. Photoelectrocolorimetrical and spectrophotometrical estimation methods are recommended. Detection range is 0,25 mg echinopsinum in 3 ml of final volume.

ссылка на эту страницу

Эхинопсин применяется в медицине в качестве нервно-мышечного стимулятора. Методы изолирования его из биологического материала не описаны.

Мы изучили возможность выделения эхинопсина из биологического материала методами, которые применяются для выделения других алкалоидов при судебно-химическом анализе. Эхинопсин изолировали подкисленным спиртом (метод Стас-Отто), водой, подкисленной щавелевой кислотой (метод А.А. Васильевой), водой, подкисленной серной кислотой (метод В.Ф. Крамаренко), водой, подкисленной трихлоруксусной кислотой, и методом Грус-Харди, модифицированным для изолирования алкалоидов.

К 100 г измельченной печени, взятой сразу же после вскрытия трупа, добавляли до 10 мл водного раствора эхинопсина (5 мг/мл). Для метода Грус-Харди брали 50 г измельченной печени. Пробы оставляли на 24 ч при комнатной температуре, периодически перемешивая. Кислые подщелоченные вытяжки экстрагировали хлороформом (по методу В.Ф. Крамаренко кислую вытяжку экстрагировали эфиром). После выпаривания органических растворителей в сухих остатках определяли количество выделенного эхинопсина фотоэлектроколориметрически и спектрофотометрически.

Определение эхинопсина фотоэлектроколориметрическим методом. Эхинопсин, взаимодействуя с хлоридом окисного железа, дает окрашивание. Эту цветную реакцию мы положили в основу фотоэлектроколориметрического метода количественного определения. Сухие остатки выделенного эхинопсина растворяли в воде (хлороформные извлечения из кислых вытяжек и вытяжек, полученных методом Грус-Харди, растворяли в 20 мл воды, а сухие остатки после выпаривания хлороформных извлечений из щелочных вытяжек растворяли в 10 мл воды). Через 20— 30 мин брали по 2 мл полученных растворов, прибавляли по 0,3 мл воды, 0,5 мл 3% водного раствора хлорида окисного железа и по 0,2 мл раствора фторида натрия (реактив состоит из 40 мл воды, 60 мл 0,1 н. раствора соляной кислоты и 1 г фтористого натрия). Раствором сравнения была смесь 2,3 мл воды, 0,5 мл 3% водного раствора хлорида окисного железа и 0,2 мл подкисленного водного раствора фторида натрия.

Данный метод является специфическим. Об этом свидетельствует то, что при работе с материалом, не содержащим эхинопсина, оптическая плотность извлечений была равна нулю. Светопоглощение окрашенных растворов подчиняется закону Бугера — Ламберта — Бера в пределах концентраций от 0,2 до 3 мг эхинопсина в пробе. Чувствительность метода 0,25 мг эхинопсина в 3 мл конечного объема.

Определение эхинопсина спектрофотометрическим методом. При изучении возможности применения УФ-спектрофотометрии предварительно изучали УФ-спектр поглощения растворов эхинопсина в воде. Установили, что эхинопсин имеет максимумы светопоглощения в воде при длинах волн 235, 323 и 335 нм. Более интенсивным является максимум при длине волны 235 нм, при котором и производили определение.

Светопоглощение водных растворов эхинопсина подчинялось закону Бугера — Ламберта — Бера в пределах концентраций препарата от 0,3 до 1 мг в 100 мл. Удельный показатель поглощения в водном растворе при длине волны 235 нм равен 1148,5±5,54.

Были также сняты УФ-спектры поглощения вытяжек из печени, не содержащей эхинопсина (контроль). Растворы сухих остатков этих вытяжек в воде оказались оптически пустыми (за исключением растворов вытяжек, полученных по методу Стае — Отто). Результаты этих предварительных опытов и позволили определить извлеченный эхинопсин спектрофотометрическим методом. Объектом исследований во всех случаях был биологический материал, не подвергавшийся гнилостному разложению.

Сравнительная оценка методов изолирования эхинопсина

Метод изолированияНайдено эхинопсина (в %)
фотоэлектроколориметрическим методомспектрофотометрическим методом
в хлороформных извлечениях из вытяжек
кислыхподщелоченныхкислыхподщелоченных
Стас—Отто23—261—2Не определялиНе определяли
А.А. Васильевой34—3814—1933—3814—19
В.Ф. Крамаренко4—621—264—621—25
Грус-ХардиНе определяли35—44Не определяли35—44
Водой, подкисленной
трихлоруксусной кислотой
30—346—1031—346—9

Для определения спектрофотометрическим методом брали по 1 мл раствора сухих остатков (см. фотоэлектроколориметрический метод) и доводили водой до 100 мл. Оптическую плотность измеряли спектрофотометром СФ-4А при длине волны 235 нм (против воды).

Полученные нами данные приведены в таблице. Из данных таблицы следует, что эхинопсин извлекается как из кислых, так и из подщелоченных вытяжек.

Выводы

  1. Проведена сравнительная оценка изолирования эхинопсина 5 методами.
  2. Наиболее эффективным является метод А.А. Васильевой, основанный на изолировании эхинопсина водой, подкисленной щавелевой кислотой, а также метод изолирования эхинопсина водой, подкисленной трихлоруксусной кислотой и метод Грус-Харди.
  3. Разработаны фотоэлектроколориметрический спектрофотометрический методы количественного определения выделенного эхинопсина.

похожие материалы в каталогах

Судебно-химические исследования

похожие статьи

К вопросу об анализе фосфорорганических пестицидов методом ТСХ / Горбачева Н.А. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 145-146.

Проблемные аспекты химикотоксикологического исследования психоактивных веществ / Клименко Т.В., Клевно В.А., Максимов А.В. // Судебная медицина. — 2018. — №4. — С. 36-40.

Установление наличия кала в следах на вещественных доказательствах методом восходящей тонкослойной хроматографии / Четвертнова А.П., Федоровцев А.Л., Эделев Н.С. // Судебная медицина. — 2018. — №4. — С. 30-32.

Влияние давности и температуры хранения трупной крови на показатели веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) / Эделев И.С. // Вестник судебной медицины. — Новосибирск, 2018. — №3. — С. 15-18.

Спектрофотометрическое исследование мекония и кала в следах на вещественных доказательствах / Четвертнова А.П., Федоровцев А.Л., Эделев Н.С. // Вестник судебной медицины. — Новосибирск, 2018. — №3. — С. 36-38.