Выявление группового антигена A1 в смешанных с кровью пятнах слюны и спермы методами иммуноэлектрофореза

/ Николенко О.В. Дианова Т.Н.  // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1987 — №3. — С. 27-28.

Николенко О.В., Дианова Т.Н. Выявление группового антигена A1 в смешанных с кровью пятнах слюны и спермы методами иммуноэлектрофореза

НИИ судебной медицины (дир, — член-корр. АМН СССР А.П. Громов) Минздрава СССР, Москва

УДК 340. 624. 4: 612. 1 18. 221.2

Выявление группового антигена A1 в смешанных с кровью пятнах слюны и спермы методами иммуноэлектрофореза.

Николенко О. В., Дианова Т. Н. Судеб. -мед. экспертиза, 1987, № 3, с. 27—28.

Методами иммуноэлектрофореза изучена возможность выявления антигена А1 в пятнах слюны и спермы групп A1Se и A1BSe, смешанных с кровью групп 0, А, В или АВ, с помощью экстракта анти-Анр. Установлено, что независимо от группы присутствующей крови выявление антигена А1 в указанных выделениях было специфичным, однако примесь крови групп 0 или В в ряде случаев затрудняла его выявление.

Таблица 1. Библиография: 1 название.

Поступила 31.03.86

О. V. Nikolenko, Т. N. Dianova

GROUP A, ANTIGEN DETECTION IN SALIVARY AND SEMINAL STAINS MIXED WITH BLOODSTAINS BY MEANS OF IMMUNOELECTROPHORESIS

Extractions from Group A1 Se and A1B Se salivary and seminal stains mixed with 0, A, В or AB bloodstains were investigated by means of Immunoelectrophoresis (using anti-AНР). The presence of blood did not affect reaction specificity but in some cases it may cause difficulties in A1 antigen detection.

ссылка на эту страницу

Необходимость дифференцирования групповых антигенов системы АВО в выделениях и крови возникает перед экспертом почти в каждой экспертизе, связанной с половыми преступлениями. Методы абсорбции-элюции для этой цели непригодны. Они специфичны и высокочувствительны, но по общепринятой методике не позволяют дифференцировать антигены в смешанных следах выделений и крови. Методы иммуноэлектрофореза для решения указанных задач в судебной медицине еще нс применяются, поскольку необходимы реагенты. преципитирующие групповые вещества.

Ранее нами было установлено, что для выявления антигена А, в выделениях методом встречного иммуноэлектрофореза может быть использован 1% солевой экстракт из белковых желез виноградной улитки Helix pomatia (антн-АНР). Этот реагент специфично выявляет антиген А1 в выделениях лиц, относящихся к категории выделителей, и не реагирует с вытяжками из пятен крови.

Целью настоящей работы было изучение возможности выявления методами иммуноэлектрофореза антигена A1 в пятнах слюны и спермы, смешанных с кровью, с помощью 1% экстракта анти-АНР.

Исследовали вытяжки из пятен слюны и спермы A1Se и A1BSe. смешанных с кровью групп А, В, 0 или АВ. Пятна экстрагировали дистиллированной водой в течение 2—72 ч при комнатной температуре. В качестве опорных сред применяли 1,5 % агаровый и 2 % агарозный гели, приготовленные на мединал-вероналовом буфере (pH 8,6, ионная сила 0,1).

Использовали следующие методы электрофореза:

  • 1) встречный иммуноэлектрофорез;
  • 2) ракетный иммуноэлектрофорез (при использовании этого метода на поверхность геля наносили анти-Анр и выдерживали блок геля во влажной камере при комнатной температуре в течение 20 ч, затем в геле вырезали лунки и вносили туда испытуемые вытяжки);
  • 3)    метод иммуноэлектрофореза по Grabar (после проведения электрофореза вытяжек в геле вырезали канавки параллельно разделенным белковым зонам и заполняли их анти-Анр; диффузию антигена A1 и антн-АНР проводили во влажных камерах в термостате при 37°С в течение 48—72 ч);
  • 4)    модифицированный нами метод параллельного иммуноэлектрофореза [1]. Суть данной модификации заключается в следующем: в геле вырезают 3 лунки (одну для вытяжек из пятен, две для анти-Анр). Одна из лунок для антн-Анр располагается на той же линии, перпендикулярной к оси катод — анод, что и лунка с вытяжкой, другая смещена на 1 см в сторону анода и на 0,4 см в сторону от оси катод — анод. Во все лунки вносят соответствующие реагирующие компоненты и проводят электрофорез. Затем пластинки с гелем помещают во влажные камеры и на 72 ч оставляют в термостате при 37°С.

После иммуноэлектрофореза (встречного и ракетного) и по завершении диффузии (при параллельном иммуноэлектрофорезе и иммуноэлектрофорезе по Grabar) блоки геля отмывали от непрореагировавших белков 0,9 % раствором хлорида натрия, высушивали и окрашивали амидо черным 10Б. Избыток красителя с геля отмывали 7 % раствором уксусной кислоты.

Проведено 157 исследований образцов спермы (18) и 314 исследований образцов слюны (12), смешанных с кровью. Образование преципитатов имело место в 147 исследованиях спермы и 294 исследованиях слюны (см. таблицу).

Как видно из таблицы, примесь крови несколько затрудняет выявление антигена А1 спермы в смешанных следах.

Примесь крови влияет и на возможность выявления антигена А1 слюны. Однако установлена определенная закономерность. Так. независимо от группы крови антиген A1 слюны в смешанных следах был выявлен практически во всех случаях при использовании методов встречного и ракетного иммуноэлектрофореза. Методами параллельного иммуноэлектрофореза и иммуноэлектрофореза по Grabar в образцах слюны, к которым была добавлена кровь групп В и 0, антиген A1 был выявлен соответственно в 80 и 84 % случаев. Причиной этого, по-видимому, мог быть α-агглютинин, присутствующий в крови этих групп. Соединяясь с антигеном А1 слюны, он образует растворимый комплекс А1-α. Размеры комплекса больше, чем каждого из составляющих компонентов, поэтому ему труднее перемещаться в геле в процессе иммуноэлектрофореза и особенно при простой диффузии. При параллельном иммуноэлектрофорезе и иммуноэлектрофорезе по Grabar перемещение антигена и антитела навстречу друг другу происходит исключительно за счет простой диффузии. В случае эквимолярного соответствия антигена и антитела в вытяжке присутствуют только комплексы А1-α, которые либо вообще не перемещаются, либо перемещаются только на небольшое расстояние. Это, по-видимому, и является одной из основных причин отрицательных результатов при использовании методов параллельного иммуноэлектрофореза и иммуноэлектрофореза по Grabar. Положительный результат реакции с этими же пятнами при использовании методов встречного и ракетного иммуноэлектрофореза можно объяснить диссоциацией части комплексов под влиянием электрического поля. Не исключено, что под влиянием электрического поля часть комплексов А1-α все же перемещается.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют, что в смешанных следах примесь крови независимо от ее групповой принадлежности не препятствует специфичному выявлению антигена A1 слюны и спермы групп A1Se и A1BSe методами иммуноэлектрофореза с помощью анти-АНР. Это может быть использовано для дифференцирования антигена A1 этих выделений от антигена А1 крови.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кудрина Т.А. // Лаб. дело. — 1982. — №7. — С. 44—46.

похожие статьи

К вопросу об использовании макроглобулинов крови человека при судебно-медицинском исследовании трупа / Яковлев Д.Ю. // Вестник судебной медицины. — Новосибирск, 2018. — №4. — С. 16-18.

К анализу и интерпретации результатов при установлении видовой принадлежности биологических объектов (случай из практики) / Кулясова Н.А., Недолуга Н.О. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2018. — №17. — С. 143-145.

Дифференциация в смешанных пятнах антигена А выделений от антигена А крови при помощи лектина / Потапов М.И. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №3. — С. 21-26.

Сравнительное исследование антигенов системы АВ0 в слюне, сперме и в секрете влагалища / Масис Т.М. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №2. — С. 21-27.

Выявление в сыворотках крови людей антител к антигенам системы Gm / Резникова М.Н., Баринова Л.И., Соловьева Н.А., Башлай А.Г., Моргулис Н.Б. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №1. — С. 35-38.

Выявление спермина в пятнах спермы путем электрофореза на бумаге / Буреш Л. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №3. — С. 46-47.

О применении сока из клубней картофеля для обнаружения спермы на вещественных доказательствах / Тюрникова Ф.В. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №2. — С. 27-28.

О реакции на сперму с соком из клубней картофеля / Инглез О.В. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №1. — С. 49-51.

К вопросу о реакции человеческой спермы с картофельным соком / Барсегянц Л.О. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1967. — №3. — С. 35-39.

Установление наличия и видовой принадлежности человеческой спермы при помощи некоторых растительных экстрактов / Барсегянц Л.О. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1967. — №1. — С. 34-36.