Судебно-медицинская серология: успехи и трудности

Для судебной медицины 1901 г. ознаменовался двумя крупнейшими событиями, заложившими основы судебно-медицинской серологии: Уленгут доказал возможность различия пятен крови человека и животных с помощью кроличьих преципитирующих сывороток¹, а Ландштейнер открыл у человека группы крови. Судебно-медицинская серология стала быстро развиваться, и с того времени, когда ее практическое значение стало неоспоримым, она имеет обоснованные перспективы развития.

Своеобразие судебно-медицинской серологии состоит в том, что она, являясь в прикладном отношении неотъемлемой частью судебной медицины, в научном отношении основана на пограничных разделах иммунологии, изосерологии, иммуногенетики, биологии, иммунохимии, гематологии и ряда других дисциплин в их целевом сочетании для использования в судебной медицине с помощью иммунологических и серологических методов исследования.

Общие основы, обеспечивающие прогресс судебно-медицинской серологии в СССР, определяются, во-первых, задачами судебной медицины как помощницы советского правосудия; во-вторых, значительным развитием общей и прикладной иммунологии, о чем свидетельствуют материалы 34-й сессии АМН СССР (1973); в-третьих, использованием судебно-медицинской серологией достижений других естественных наук, адаптированием ею иммунологических и серологических методов, разработанных и применяемых в качестве основных и вспомогательных приемов исследования другими медицинскими и биологическими дисциплинами.

Рассмотрим некоторые новые данные судебно-медицинской серологии.

Знания об антигенной структуре системы Lewis в последние годы претерпели существенные изменения. Понятие о том, что в эритроцитах взрослых людей эта система представлена 3 группами — Le(a^-b+), Le(a+b^-), Le(a^-b^-), дополнено новыми данными о группе Le (а^-b^-). Существование именно этой группы, якобы не имеющей антигенов, снижало эффективность использования системы Lewis в судебно-медицинской серологии, когда по крови требовалось установить категорию выделительства. В 1970 г. мы доказали, что в эритроцитах людей группы Le(a^-b^-), являющихся выделителями веществ АВН, содержится специфический антиген системы Lewis, названный нами Le^d. Наше предположение, сделанное на основе анализа концепции Grubb—Ceppellini о том, что должен существовать еще и 4-й антиген (Le^c), свойственный эритроцитам невыделителей с группой крови Le(a^-b^-), было подтверждено в 1972 г. Этот гипотетический антиген обнаружили Gunson и Latham с помощью случайно выявленной человеческой сыворотки, содержащей антитела aHTH-Le^c.

Таким образом, кровь каждого взрослого человека дифференцирована по системе Lewis и имеет одну из 4 групп: Le(a+b-с-d-), Le(a^-b+c^-d^-), Le(a^-b^-c^-j^-d^-), Le(a^-b^-с^-d^-j^-), частота которых в московской популяции соответственно 13,9%, 74,2%, 2,1% и 9,8%. Люди с группой крови Le(b+) и Le(d^-f) являются выделителями веществ АВН, а лица с группой крови Le(a+) и Le(c+) — невыделителями их. Важно отметить, что, несмотря на открытие 2 новых антигенов, генетическая концепция Grubb—Ceppellini о наличии 2 пар аллелей (Se—se, Le—1е) для системы Lewis осталась непоколебленной (см. рисунок. В соответствии с этой концепцией можно предположить, что 5-го самостоятельного антигена Le не существует. Генетическое объяснение выделительства антигенов Le по слюне опубликовано нами в 1973 г.

Выяснение антигенной характеристики системы Lewis создало предпосылки для изготовления новых диагностических сывороток с учетом потребностей судебной медицины. Мы длительно (до 1¹/₂ лет) с 5—6-месячными перерывами иммунизировали коз кипяченой слюной людей, имеющих разные группы крови по Le. Полученные сыворотки многократно абсорбировали трипсинизированными эритроцитами группы 0 с учетом их группы по Le. Серологические свойства изготовленных экспериментальных серий сывороток с неполными антителами, пригодных для исследования эритроцитов группы 0 в трипсин-тесте, представлены в таблице (к ним присоединены изготовляемые сыворотки aHTH-Le^a и aHTH-Le^b).

Дивалентные сыворотки (с двойной активностью) легче изготовлять, чем моноспецифичные, и они удобны для исследования жидкой крови в научных и практических целях. Имея некоторые 2 дивалентные сыворотки, например aHTH-Le^m и анти-Le^х, можно определить любую из 4 групп. Сыворотка анти-Le^х позволяет различать Le- и lе-положительные образцы крови, а сыворотки анти-Le⁸ и анти- Le ^ns — всех выделителей и невыделителей по системе АВО. Новые сыворотки апробированы в Листеровском институте (Лондон) и в Международной лаборатории стандартизации групп крови при ВОЗ (Лондон).

Козьи сыворотки анти-Le с неполными антителами

Сыворотка	Группа эритроцитов
	Le (a+)	Le (b+)	Le (c+)	Le (d+)
анти-Lea	+	—	—	—
анти-Leb	—	+	—	—
анти-Leс	—	—	+	—
анти-Led	—	—	—	+
анти-Les	—	+	—	+
анти-Lens	+	—	+	—
анти-Lem	—	+	+	—
анти-Lel	+	—	—	+
анти-Lex	+	+	—	—

Обозначения: + наличие гемагглютинации; — ее отсутствие; s — выделитель; ns — невыделитель; m — медиальный; 1 — латеральный.

Интересную эволюцию претерпевают реагенты анти-Р₁. Хотя эти антитела, по данным ряда авторов, часто обнаруживаются в сыворотках свиней и P-отрицательных людей, практика показала, что такие сыворотки редко бывают с высоким титром, пригодным для экспертных целей. Разработка научных основ изготовления кроличьих сывороток анти-P₁ (М.В. Мишакова, 1960, 1961), признание их качества упомянутой Международной лабораторией ВОЗ позволили внедрить их в судебно-медицинскую практику.

 

Схема генетической структуры системы Lewis для групп крови. В скобках указаны символы групп по Wiener (1971).

 

Обнаружение в жидкости эхинококковых кист животных и человека P-подобного вещества позволило изготовлять с помощью этого гетерогенного антигена животного происхождения козьи сыворотки анти-P₁ и получить обнадеживающие данные об определении слабо выраженного антигена Р в жидкой крови, если кроликов иммунизировать нативными или трипсинизированными эритроцитами, а коз — эхинококковым антигеном, но абсорбировать сыворотки эритроцитами, обработанными трипсином (М.В. Мишакова и соавт., 1971).

Антигенно-серологическое единство и многообразие органической природы проявляются в существовании не только гетерофильных антителоподобных веществ типа лектинов, но и гетерогенных антигенов, сходных с групповыми субстанциями организма человека. Такие антигены обнаружены у животных, микроорганизмов и высших растений. Изучается возможность (М.В. Мишакова) получения для судебно-медицинских целей сывороток анти-Р иммунизацией коз P-подобным веществом, обнаруженным Reimann в цветах липы и листьях мать-и-мачехи. Данные А.П. Загрядской и соавт. (1973) о выявлении антигена Р в фиксированных клетках смешанной агглютинацией, по-видимому, расширяют экспертное применение системы Р.

Основные гетероиммунные антиэритроцитарные сыворотки анти-А и анти-В будут дополнены сыворотками аналогичной активности, полученными иммунизацией животных слюной выделителей. Основополагающая по этому вопросу работа М. В. Мишаковой (1957) получила развитие в исследовании Н. А. Соловьевой (1974), показавшей целесообразность использования для получения такой сыворотки анти-В не кроликов, а баранов. Эти сыворотки можно будет применять в реакциях гемагглютинации, абсорбции и абсорбции-элюции. Проводятся исследования по изготовлению сывороток анти-А и анти-В с учетом IgG и IgM с целью выяснения преимуществ этих антител для судебно-медицинской серологии.

Эксперты судебно-биологических отделений имеют возможность получать из местных станций и институтов переливания крови сыворотки анти-Rh для исследования жидкой крови. Е.Е. Горянина (1973) доказала возможность выявления антигена D системы резус в пятнах крови реакцией абсорбции-элюции.

Успешно осуществляются работы по изготовлению диагностических сывороток к антигенам сывороточных систем групп крови. Показана возможность получать антитела анти-Gm на обезьянах (Н.А. Соловьева, и анти-Lp (а) на кроликах (Н.А. Соловьева, 1974). Последние сыворотки апробированы в Институте генетики человека (Марбург, ФРГ), который Международное совещание по системе Lp (1966) предложило в качестве центра для тестирования сывороток, изготовленных в разных лабораториях. Частота группы Lp(a-f-) у населения Москвы встречается в 28,8% случаев. Предпринимаются попытки добиться выработки антител анти-Gm у коз. Перспективно изготовлять сыворотки анти-Gc на кроликах, иммунизированных цельной сывороткой крови человека, — соответствующие антитела образуются в 30% случаев.   .

Завершены научные и производственные этапы изготовления кроличьих преципитирующих сывороток, довольно тонко дифференцирующих кровь животных родов семейства оленьих: косули, лося, настоящих и северных оленей (М.И. Потапов, 1974). Заслуживают внимания кроличьи сыворотки, преципитирующие белки человеческой спермы, поскольку в них совмещается органная и видовая специфичность (В.П. Чернов, 1971).

Важный вопрос для судебно-медицинской практики решается при использовании серологического метода диагностики беременности по пятнам мочи гравимуном (Л. И. Баринова, 1974; Г. А. Бабенко и Д. Я. Шабельник, 1974) и отечественным препаратом гравидадиагностикумом, а также по пятнам крови (Л. И. Баринова, 1974).

Классическая неинфекционная серология 25 лет назад пополнилась новым разделом — учением об антителоподобных веществах. Истоки этого учения возникли в нашей стране, в Дерптском университете (Stillmark, 1888). Пионерами исследования в СССР двух основных классов антителоподобных веществ в группоспецифическом отношении — растительного (лектинов) и животного (протектинов) происхождения — были судебные медики. Для целей судебно-медицинской экспертизы диагностические сыворотки являются основными серологическими реагентами. Вместе с тем научные и практические успехи учения об антителоподобных реагентах настолько значимы, что заслуживают внимания не только в настоящее время, но и в плане общих перспектив развития диагностической серологии.

Г.П. Колоколова (1974) показала, что водно-солевые экстракты из икры рыб некоторых видов содержат группоспецифичные протектины анти-Н, анти-А, анти-В, анти-B+P₁, которые пригодны для исследования жидкой крови и слюны человека, а также крови в пятнах. В икре рыб, выловленных преимущественно из водоемов СССР, обнаружены новые протектины анти-В (например, чавыча, кижуч, красноперка, кета, сазан), анти-A₁ (лещ), анти-Н (лепидоп) (Г.П. Колоколова и М.И. Потапов, 1974). Получены обнадеживающие данные о возможности изготовления экстракта анти-N с титром 1:16—1:128 из доступного в СССР растительного сырья, листьев горошка однопарного.

Отечественным ученым принадлежит приоритет обнаружения лектинов, реагирующих с гормонами и прогормонами. Л. О. Барсегянц предложила (1965) использовать лектин из клубней картофеля для установления наличия спермы. Эта реакция широко применяется в СССР, а также в НРБ, ГДР и других странах. Японские авторы (Yada и соавт., 1973), апробировав реакцию, подтвердили предложение Л.О. Барсегянц, что специфичность обусловлена взаимодействием лектина с гормоном тестостероном, и указали, что Л.О. Барсегянц первая нашла правильное объяснение ее сущности. Американские исследователи (Oss и соавт.,1971) подтвердили данные С. И. Крупник и М. И. Потапова (1967), что органоспецифичность антитиреоидного экстракта из семян гороха посевного вызвана его реакцией с прогормоном щитовидной железы тиреоглобулином.

Серологические взаимоотношения между веществами, основанные на принципе реакции антитела с антигеном, по-видимому, широко распространены в органической природе. Это взаимоотношение является одним из существенных и постоянно действующих механизмов, осуществляющих стихийные и генетически запрограммированные влияния на онтогенез и филогенез. Совокупность данных об антителоподобных веществах подтверждает предположение, что, вероятно, во всех биологических системах животного и растительного мира, в которых происходит синтез белков с каталитической, транспортной, защитной и иной функцией, имеются антителоподобные белки с гетерофильной активностью.

Основные трудности судебно-медицинской серологии в практическом и научном отношении заключаются в следующем. В области практики: а) снабжение экспертов импортными сыворотками сопряжено с постоянными трудностями; б) не решен вопрос о создании в системе переливания крови учреждения, обязанного изготавливать изосыворотки для определения групп крови, эритроцитарных и сывороточных; в) существующая система снабжения экспертов гетероиммунными сыворотками Институтом судебной медицины уже не отвечает запросам практики; г) организационные и профессионально-методические затруднения, связанные с обучением новым методам большого числа экспертов-биологов и контролем за их экспертной деятельностью.

Следует отметить относительную недостаточность научных исследований для надлежащего развития судебно-медицинской серологии. Работники кафедр судебной медицины в своей научной деятельности явно недооценивают значения судебно-медицинской серологии, хотя из истории отечественной судебной медицины известно, какой значительный вклад в этот раздел внесли судебные медики общего профиля. Расширение исследований по судебно-медицинской серологии — неотложная задача судебной медицины.

 

¹Научные основы определения видовых свойств животных белков серологическим методом были созданы Ф. Я. Чистовичем в 1899 г.