Применение молселекта при химико-токсикологических исследованиях гексобарбитала и этаминал-натрия

При очистке извлечений из биологического материала токсикологически важные вещества могут частично, а иногда и полностью теряться. Мы поставили задачу разработать простой и быстровыполнимый способ очистки, лишенный указанного недостатка.

Исследовали биологический материал, содержащий гексобарбитал или этаминал-натрий. Для очистки извлечений от примесей применяли гель молселекта G-15, который представляет собой сильно гидрофильный не ионный полисахарид с пространственной структурой, полностью индифферентный по отношению к катионам и анионам. Его используют для разделения веществ в зависимости от размера их молекул и молекулярного веса. Техника выполнения опытов с гелем молселекта аналогична разделению веществ с помощью геля сефадекса. В отечественной литературе имеется мало работ, посвященных использованию сефадекса для очистки от примесей извлечений из биологического материала, содержащего барбитураты (В.П. Крамаренко и сотр., 1971; В.Ф. Крамаренко; В.И. Попова и др., 1974; В.И. Попова, 1972), и единичные исследования об использовании молселекта.

До применения геля молселекта G-15 для очистки мы предварительно исследовали распределение чистых растворов гексобарбитала и этаминал-натрия в элюатах, полученных после пропускания растворов указанных веществ через гель молселекта.

Молселект вносили в стакан, заливали 0,02 н. раствором серной кислоты и оставляли на сутки. Затем гелем заполняли стеклянную колонку (высота столба геля 40 см, внутренний диаметр 2,5 см). Перед заполнением колонки в ее узкую часть вводили тампон из стеклянной ваты. На нижний конец колонки надевали шланг с зажимом. Колонку на 1/3 заполняли 0,02 н. раствором серной кислоты и вносили в нее суспензию геля молселекта. Через 3—5 мин открывали зажим, вследствие чего частицы геля оседали в потоке серной кислоты. Чтобы не нарушился верхний слой геля при внесении в колонку исследуемой жидкости, на него помещали кружок фильтровальной бумаги, размер и форма которого соответствовали внутреннему диаметру колонки. Подготовленную таким образом колонку использовали для гель-хроматографни. В колонку, заполненную гелем молселекта, вносили по 10 мл растворов гексобарбитала (в 1 мл 0,5 мг) или этаминал-натрия (в 1 мл 1 мг). После впитывания указанных растворов гелем молселекта эти вещества элюировали из колонки 0,02 н. раствором серной кислоты. Вытекающую из колонки жидкость собирали фракциями по 10 мл. Каждый элюат смешивали с равным объемом смеси насыщенного раствора пербората натрия и 0,3 н. раствора едкого натра (3: 1). В каждом полученном таким образом растворе определяли наличие гексобарбитала и этаминал-натрия спектрофотометрическим методом, основанным на измерении светопоглощения в УФ-области спектра (гексобарбитал определяли при длине волны 244 нм, этаминал-натрий — при 240 нм). Опыты показали, что гексобарбитал после элюирования собирается с 14-й по 27-ю фракцию, а этаминал-натрий — с 16-й по 34-ю фракцию.

После изучения распределения гексобарбитала и этаминал-натрия в колонке с гелем молселекта мы проверили влияние объема исследуемого раствора на распределение указанных препаратов в элюатах. В колонки вносили не по 10, а по 50 мл раствора, содержащего такое же количество вещества, как и 10 мл исследуемого раствора, а затем поступали как указано выше. Оказалось, что независимо от объема, в котором содержались исследуемые вещества, последние собирались в тех же фракциях элюата, что и при внесении 10 мл раствора.

Затем с помощью этого геля исследовали распределение примесей, содержащихся fв вытяжках из печени трупа. К 100 г измельченной печени, не содержавшей барбитуратов, прибавляли воду, подкисленную серной кислотой до pH 2—3, и получали извлечение по методу В.Ф. Крамаренко, предложенному для выделения алкалоидов из биологического материала. По 10 мл извлечения вносили в колонку с гелем молселекта и поступали, как при элюировании барбитуратов. Установили, что примеси, содержащиеся в вытяжках из печени трупа, после элюирования из геля молселекта в основном собираются с 8-й по 12-ю фракцию. Таким образом, примеси, находящиеся в извлечении из биологического материала, элюируются из геля молселекта раньше, чем изучаемые барбитураты.

Чтобы подтвердить эти данные, мы произвели выделение барбитуратов из извлечений, полученных настаиванием исследуемых объектов с водой, подкисленной серной кислотой до pH 2—3. С этой целью к 100 г измельченной печени прибавляли по 50 мг гексобарбитала или этаминал-натрия, растворенных в воде, смеси оставляли на сутки при периодическом перемешивании и выделяли барбитураты по методу В.Ф. Крамаренова. (1961). По 50 мл полученных вытяжек пропускали через гель молселекта и собирали гексобарбитал с 14-й по 27-ю фракцию, а этаминал-натрия — с 16-й по 34-ю фракцию. В объединенных элюатах определяли содержание барбитуратов фотоэлектроколориметрическим методом, основанным на реакции их с изопропиламином и ацетатом кобальта. Поскольку указанная реакция проводится в неводной среде, из элюатов барбитураты экстрагировали хлороформом (3 раза по 50 мл). Объединенные хлороформные извлечения выпаривали досуха и в сухих остатках определяли количество барбитуратов, выделенных указанным выше методом.

Наши опыты показали, что описанным методом, основанным на очистке извлечений из печени с помощью геля молселекта, выделяется 35—37% этаминала и 37—39% гексобарбитала.