Диагностика прижизненности механической травмы методом диск-электрофореза

/ Глушенко А.Н. Пашинян Г.А.  // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1978 — №4. — С. 26-27.

Глушенко А.Н., Пашинян Г.А. Диагностика прижизненности механической травмы методом диск-электрофореза

Кафедра судебной медицины (зав.— проф. В.М. Смольянинов) II Московского медицинского института им. Н.И. Пирогова

УДК 340.624:543.545

Диагностика прижизненности механической травмы методом диск-электрофореза. Глушенко А.Н., Пашинян Г.А. Суд.-мед. эксперт., 1978, № 4, с. 26-27.

Методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле установлено, что процентное содержание белковых фракций скелетных мышц в области прижизненной травматизации закономерно изменяется в сторону увеличения в сравнении с показателями величин соответствующих фракций интактной мышечной ткани.

Таблица 1.

 

DIAGNOSING THE INTRAVITAL ORIGIN OF MECHANICAL INJURY BY DISC ELECTROPHORESIS

A. N. Glushenko, G. A. Pashiniyan

A regular increase of protein fractions was noted in intravitally injured skeletal muscle as compared with the corresponding indices of intact muscular tissue. The method was disc electrophoresis in poliacrylamide gel.

ссылка на эту страницу

Затруднения при определении прижизненности повреждений обусловлены способностью тканей и органов к переживаемости, связанной с различной чувствительностью их к кислородной недостаточности в зависимости от степени дифференциации морфологических элементов. Выраженные макроскопические проявления прижизненности в виде обширных кровоизлияний иногда наблюдаются при механическом повреждении тканей даже через 26,5—28 ч после смерти (Н.П. Пырлина и соавт., 1973; Naewe и Bause, 1974). Не вызывает сомнений наличие тонких изменений на субклеточном уровне в виде динамики соотношений макро- и микроэлементов, активности ферментов, содержания общего белка и отдельных его фракций, подчиняющихся определенным закономерностям в живой и переживающей клетках. Регистрация этих изменений может оказаться перспективной при дифференциальной диагностике прижизненной и посмертной травматизации, что подтверждается исследованиями последних лет (Г.В. Ананьев, 1968; В.В. Филиппов и Г.А. Пашинян, 1971, и др.; Tanaka, 1966; Fazekas и Viragos, 1971; JI. Г. Шестовская, 1973). Большим преимуществом современных физических, гистохимических, биохимических методик является возможность количественной характеристики наблюдаемых явлений, что, с одной стороны, способствует объективизации экспертных выводов, а с другой — позволяет наблюдать динамику процессов во времени и служит критерием определения давности возникновения повреждений.

На возможность определения прижизненного или посмертного происхождения травмы методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) указывает Л.Г. Шестовская (1976). Мы использовали этот метод для изучения динамики процентного содержания белковых фракций скелетных мышц в области прижизненной и посмертной травмы.

Методика исследования. Травмировали резким сжатием в тисках мышцы правого бедра у белых беспородных крыс-самцов массой 200—250 г. Животных умерщвляли путем нанесения черепно-мозговой травмы. 1-ю группу крыс забили сразу после травматизации конечности, 2-ю — через 1 ч, 3-й группе травму наносили через 5 мин после смерти, 4-й — через 10 мин. после смерти. В качестве контроля использовали мышцы из симметричных участков левого бедра. Мышечную ткань освобождали от фасций, клетчатки и тщательно отмывали от крови в охлажденном физиологическом растворе, 0,5 г ткани измельчали ножницами и гомогенизировали в 2,5 мл физиологического раствора. Гомогенаты помещали в морозильную камеру холодильника по мере приготовления, чтобы исключить возможные посмертные изменения. Спустя 24 ч их размораживали при комнатной температуре и центрифугировали при 10 000 об/мин в течение 30 мин. Для приготовления образца брали 15 мкл объекта над осадком, смешивали с 0,2 мл концентрирующего мономера и подвергали полимеризации под слоем электродного буфера на поверхности концентрирующего крупнопористого геля готовой для электрофореза колонки. Исследование проводили на серийном приборе для электрофореза модели 69 фирмы «Реанал» (ВНР). Белковые фракции разделяли в геле, приготовленном из рабочих растворов для буферной системы с pH 8,9, и геля 7% концентрации, прописи которых приведены в проспекте к прибору для электрофореза модели 69 фирмы «Реанал». После полимеризации геля трубки помещали в штатив прибора и заливали в верхнюю и нижнюю камеры по 1 л трис-глицинового буфера с pH 8,3. Электрофорез проводили в среднем в течение 11 ч, разделение останавливали, когда кольцо Кольрауша достигало нижнего конца трубки. Для более равномерного разделения белков в первые 30 мин сила тока была 10 мА, напряжение — 110 В, в дальнейшем силу тока увеличивали до 20 мА, напряжение — до 350 В. После окончания разделения гель извлекали из трубок и окрашивали 1% раствором амидо черного Б в течение 30 мин. Не связанный с белками краситель отмывали в 7% растворе уксусной кислоты. Количественную оценку полученных данных проводили методом прямой денситометрии на интегрирующем приборе «Хромоскан». Для уменьшения влияния сферической аберрации использовали диафрагму с точечным отверстием площадью 1 мм2. Соотношение белковых фракций рассчитывали в относительных единицах.

Описанным методом получили до 14 белковых фракций, из которых на денситограммах в виде пиков зафиксированы наиболее выраженные. Для статистической обработки использовали 5 стабильно записывающихся фракций, которые обозначили цифрами 1, 2, 3, 4 и 5 в том порядке, в каком они расположены на денситограмме начиная от линии старта. Результаты исследований приведены в таблице.

Динамика белковых фракций скелетных мышц (в %)

Примечание. травм. — травмированный участок, инт.— интактный участок.

Из данных таблицы видно, что диагностические признаки прижизненности травмы имеют показатели белковых фракций 2 и 4. При сравнении процентного содержания указанных фракций поврежденного участка с интактным определяется наличие достоверной разницы, позволяющей судить о прижизненности травмы, даже возникшей непосредственно перед смертью. При травме давностью 1 ч установлено, что достоверное диагностическое значение имеют величины процентного содержания 2, 4 и 5-й фракций. При причинении механических повреждений через 5 мин (3-я группа эксперимента) и 10 мин (4-я группа эксперимента) после смерти во всех 5 фракциях не обнаружено достоверных отличий от показателей величины соответствующих фракций интактной мышечной ткани. Причем при возникновении повреждения через 10 мин после смерти вывод о посмертном происхождении его категоричен, в то время как в 3-й группе эксперимента наблюдаются еще отдельные признаки переживаемости в виде незначительного (недостоверного) увеличения процентного содержания фракции 5 в области травматизации.

похожие материалы в каталогах

Прижизненность образования повреждений

похожие статьи

Установление прижизненности механической травмы по биохимическим показателям / Асташкина О.Г., Столярова Е.П., Полтарев С.В., Терешина Н.А. // Медицинская экспертиза и право. — 2010. — №3. — С. 43-45.

Использование метода контактной микрорентгенографии для дифференциальной диагностики прижизненных и посмертных повреждений надкостницы / Чистова Т.И. // Матер. IV Всеросс. съезда судебных медиков: тезисы докладов. — Владимир, 1996. — №2. — С. 45-46.

К вопросу посмертного хемотаксиса лейкоцитов / Бихерт Е.А., Демчук О.Н., Власюк И.В. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2018. — №17. — С. 47-50.

Сосудистые реакции в зоне огнестрельной раны в ближайшие сроки после ее нанесения / Венглинская Е.А., Святощик В.Л., Щегель С.М. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1967. — №4. — С. 20-23.

Основные и дополнительные иммуногистохимические маркеры прижизненности странгуляционной механической асфиксии / Богомолов Д.В., Фетисов В.А., Денисова О.П., Збруева Ю.В., Семенов Г.Г. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 2018. — №2. — С. 11-13.