Изготовление сывороток анти-Gc на основе производства кроличьих сывороток, преципитирующих белки крови человека

/ Ломовицкая Л.И.  // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1977 — №1. — С. 55-57.

Ломовицкая Л.И. Изготовление сывороток анти-Gc на основе производства кроличьих сывороток, преципитирующих белки крови человека

Научно-исследовательский институт судебной медицины (дир. — проф. В.И. Прозоровский) Министерства здравоохранения СССР, Москва

УДК 615.373:612.118.221.2-08)012

Изготовление сывороток анти-Gc на основе производства кроличьих сывороток, лреципитирующих белки крови человека. Ломовицкая Л.И. «Суд.-мед. эксперт.», 1977, № 1, с. 55-57.

Иммунизацией кроликов нормальной сывороткой крови человека изготовлены диагностические сыворотки анти-Gc с титром 1:2—1:15. Полученные сыворотки были пригодны для диагностики группы Gc в жидкой крови.

Таблица 1.

 

PREPARATION OF ANTI-Gc SERA BASED ON PRODUCTION OF RABBIT SERA PRECIPITATING HUMAN BLOOD PROTEINS

L. I. Lomovitskaya

Diagnostic anti-Gc sera with a titre of 1:2—1:15 were prepared by immunising rabbits with normal human blood sera. The sera thus acquired were suitable for Gc grouping of liquid blood.

ссылка на эту страницу

При определении групп изосерологической системы Gc широко используют имму-лоэлектрофорез (Hirschfeld, 1960; Е.А. Ильина, 1972), электрофорез в крахмальном геле (Schultze и соавт., 1962; Arfors и Beckman, 1963; В.А. Спицин и О.В. Ирисова, 1973), в полиакриламидном геле (Kitchin, 1965; М.О. Тер-Маркарьян и Э.Г. Ларский, 1966; Н.Н. Старостин, 1975) и на целлюлозоацетатных пленках (Geserick и Schneider, 1959). Фирма «Миллипор» рекомендует применять для иммуноэлектрофореза целлюлозоацетатную пленку с «Panageb, который увеличивает разрешающую способность метода.

Для диагностических целей при определении групп изосерологических систем Gc, Нр (гаптоглобина), Ср (церулоплазмина) и др. нужно проводить исследования, используя различные методы электрофореза.

Для установления групп Gc человека методом ИЭФ необходимы гетероиммунные диагностические сыворотки анти-Gc.

Антитела анти-Gc удовлетворительно вырабатываются в организме кроликов (Hirschfeld, 1959; Engelhard, 1970), коз (Kerde и соавт., 1962; фирма «Biotest, 1974) и лошадей (Bundschuh и Krause, 1965).

В качестве антигена для иммунизации применяли очищенную и обогащенную субстанцию Gc из асцитной жидкости с определенным типом Gc (Engelhard, 1970), «i-фракцию сыворотки человека (Schultze и соавт., 1962), смесь сывороток лиц группы 0, абсорбированных на каолине (Hirschfeld, 1959). Turowska и Turowski (1965) использовали человеческую сыворотку с адъювантом, состоящим из эндотоксина Е. coli и фракции очищенного липополисахарида.

А.К. Туманов (1968) исследовал 18 серий сывороток, преципитирующих белок человека, изготовленных в сывороточном отделе Научно-исследовательского института судебной медицины, и нашел 3 серии с антителами анти-Gc.

Целью настоящей работы было изготовление гетероиммунных сывороток анти-Gc.

Материал и метод

Для получения количественно достоверных результатов иммунизировали кроликов породы шиншилла. Была использована схема иммунизации, постоянно применяемая в сывороточном отделе Научно-исследовательского института судебной медицины для изготовления гетероиммунных сывороток, преципитирующих белок крови человека. В 1, 3 и 5-й дни иммунизации антиген вводили кроликам внутривенно по 1 мл. Первую-реиммунизацию проводили спустя 26 дней от начала иммунизации 2 мл сыворотки внутрибрюшинно, а через день 1 мл антигена вводили внутривенно. Последующие реиммунизации осуществляли через 1—6 мес по той же схеме.

В качестве антигена использовали нормальную человеческую сыворотку без учета группы по системе Gc (117 кроликов —1-я экспериментальная партия) и с учетом ее (60 кроликов — 2-я экспериментальная партия). Сыворотки с учетом группы по системе Gc были подобраны от 112 доноров Московской городской станции переливания крови с помощью гетероиммунных кроличьих сывороток анти-Gc, изготовленных нами

Наличие антител анти-Gc в иммунных неабсорбированных сыворотках определяли методом иммуноэлектрофореза по Scheidegger (1955) в модификации Hirschfeld.

Сила тока 35—40 мА (на каждую пластину размером 13X18 см), время электрофореза 11/2—2 ч.

В каждый опыт вводили 3 сыворотки микродоноров института с известной группой по системе Gc. Результаты учитывали после 18—20 ч экспозиции во влажной камере при температуре 37°.

Титр антител анти-Gc устанавливали методом ИЭФ с разведениями иммунной сыворотки 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:10, 1:12 и т. д.

Титр преципитинов в иммунных неабсорбированных кроличьих сыворотках определяли реакцией кольцепреципитации по Чистовичу — Уленгуту с разведениями антигена 1:1000, 1:5000, 1:10 000.

Результаты

Антитела анти-Gc были выявлены в крови 48 кроликов из 177.

Из 117 кроликов, иммунизированных нормальной сывороткой крови человека без; учета группы Gc, антитела анти-Gc выработали 35 животных, а из 60 кроликов, иммунизированных с учетом группы Gc, — 13. Незначительное превышение количества кроликов, выработавших антитела анти-Gc после иммунизации их подобранной заранее сывороткой, не может быть учтено, поскольку в эту экспериментальную партию вошли животные, уже являющиеся продуцентами преципитинов и претерпевшие более 2 реиммунизаций. По мере увеличения длительности иммунизации в, целом увеличивалось количество животных с антителами анти-Gc. В то же время в процессе реиммунизации животные вырабатывали побочные преципитины, реагирующие, в частности, с белковыми фракциями, расположенными в зоне Gc. Интенсивность этих линий преципитации тоже возрастала.

Из 48 сывороток, содержащих антитела анти-Gc, только 13 были пригодны без абсорбции для тестирования сывороток крови человека по системе Gc, остальные нуждались в абсорбции побочных преципитинов (см. таблицу).

Одновременное присутствие в пригодных сыворотках антител к альбумину, трансферрину или а2-макроглобулину не мешало диагностике групп Gc в сыворотке крови человека.

Сыворотки кроликов 2-й экспериментальной партии (иммунизированные с учётом группы Gc ), содержащие антитела анти-Gc, позволяли одинаково эффективно диагностировать все группы Gc вне зависимости от того, сыворотка какой группы была применена для иммунизации.

Мы исследовали иммунные сыворотки, преципитирующие белок человека с титром преципитинов 1 : 10 000 и менее. Из 95 сывороток, титр которых в реакции кольцепреципитации был менее чем 1 : 10 000, антитела анти-Gc были выявлены в 12 сыворотках. Было отмечено, что сыворотки, преципитирующие белок крови человека с низким титром, часто содержат антитела только к одной из белковых фракций и являются моноспецифическими.

Титр антител анти-Gc исследованных сывороток находился в диапазоне 1:2—1:15 и не зависел от титра преципитинов, определенного в реакции кольцепреципитации.

Ряд серий иммунных сывороток анти-Gc проверили на сохраняемость антител анти-Gc. Большинство сывороток были пригодны для диагностики групп Gc в жидкой крови в течение 1 - 1 1/2 лет.

Выводы

  1. Показана возможность изготовления сывороток анти-Gc на основе производства кроличьих сывороток, преципитирующих белок человека, что снижает себестоимость сывороток анти-Gc и повышает эффективность производства.
  2. Оптимальный диапазон длительности иммунизации кроликов с целью изготовления сывороток анти-Gc при условии их использования без абсорбции находится в пределах 1—9 мес.
  3. При иммунизации животных нормальной сывороткой человека не обязателен подбор ее по группе Gc.

похожие материалы в каталогах

Судебно-биологические исследования

похожие статьи

К вопросу об использовании макроглобулинов крови человека при судебно-медицинском исследовании трупа / Яковлев Д.Ю. // Вестник судебной медицины. — Новосибирск, 2018. — №4. — С. 16-18.

К анализу и интерпретации результатов при установлении видовой принадлежности биологических объектов (случай из практики) / Кулясова Н.А., Недолуга Н.О. // Избранные вопросы судебно-медицинской экспертизы. — Хабаровск, 2018. — №17. — С. 143-145.

Дифференциация в смешанных пятнах антигена А выделений от антигена А крови при помощи лектина / Потапов М.И. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №3. — С. 21-26.

Сравнительное исследование антигенов системы АВ0 в слюне, сперме и в секрете влагалища / Масис Т.М. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №2. — С. 21-27.

Выявление в сыворотках крови людей антител к антигенам системы Gm / Резникова М.Н., Баринова Л.И., Соловьева Н.А., Башлай А.Г., Моргулис Н.Б. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1968. — №1. — С. 35-38.