Реакция обнаружения хлорофоса (Сообщение II)

Сложные эфиры фосфиновой кислоты способствуют окислению ароматических аминов щелочным раствором перекиси водорода с образованием желтого окрашивания (Gehauf с соавторами; А.Ф. Фурсов), а продукт дегидрохлорирования хлорофоса — 0,0-диметил-0-(2,2дихлорвинил)-фосфат дает в соответствующих условиях синее окрашивание с 2,4-динитрофенил-гидразином (Hughes) и оранжевое с ацетоном (Mitsui с соавторами). Мы решили на такой основе разработать реакции для обнаружения хлорофоса. При этом было установлено, что он также дает окрашивание с указанными реагентами.

Реакция с о-толидином. К 0,2—0,5 мл спиртового или водного раствора хлорофоса в фарфоровой чашечке прибавляли 1 мл 0,5% раствора о-толидина в ацетоне и 1 мл щелочного раствора перекиси водорода (3 части 0, 5% раствора едкого натра и 2 части 3% раствора перекиси водорода). Сразу возникало желтое или оранжевое окрашивание. Открываемый минимум 10 мкг. Предельное разбавление 1:100 000.

Реакция с 2,4-динитрофенилгидразином. К 1—10 каплям раствора хлорофоса в маленькой пробирке прибавляли 2 капли 1, 2 н. раствора едкого натра и оставляли на 20 мин. при комнатной температуре. Затем добавляли 1 каплю 0, 1% раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 4 н. растворе соляной кислоты и выдерживали 30 мин. на водяной бане при температуре 50—70°. После охлаждения к смеси прибавляли каплю 4 н. раствора едкого натра и 0, 5 мл этилового спирта. Тотчас же появлялось синее или сине-фиолетовое окрашивание. Открываемый минимум 6, 7 мкг. Предельное разбавление 1:10 000.

Реакция с ацетоном. К 0,1 — 1 мл раствора хлорофоса в этиловом спирте прибавляли 1 мл ацетона и 0, 5 мл 0, 5 н. спиртового раствора едкого натра. Через 5—15 мин. наблюдалось розовое окрашивание, переходящее в красное, а затем в оранжевое. Открываемый минимум 30 мкг. Предельное разбавление 1:10 000.

Специфичность реакций проверяли с хлоринданом, диэльдрином, тиофосом, альдрином, ДДТ, гептахлором, гексахлораном, эндрином, хлороформом, хлоралгидратом, дихлорэтаном и пертаном. Все они реакции с ацетоном не давали. Хлоралгидрат давал черное с фиолетовым оттенком окрашивание в реакции с 2,4-динитрофенилгидразином (открываемый минимум 50 мкг), тиофос — темно-красное окрашивание, переходящее в бурое, и такого же цвета осадок в реакции с о-толидином (открываемый минимум 25 мкг); метафос в реакции с о-толидином давал аналогичный с хлорофосом эффект (открываемый минимум 30 мкг).

С целью проверки возможности применения разработанных нами реакций для установления наличия хлорофоса в трупном материале проведены опыты с печенью трупа и внутренними органами отравленного хлорофосом кролика.

К 100 г измельченной печени добавляли 50 мг чистого хлорофоса. Смесь перемешивали, оставляли при комнатной температуре на сутки, после чего хлорофос извлекали подкисленной водой по методу Васильевой с последующим извлечением хлороформом из кислой среды. Объединенные хлороформные извлечения испаряли при комнатной температуре. Остаток, состоящий из бесцветных игольчатых кристаллов и их сростков, растворяли в 10 мл дистиллированной воды и исследовали предлагаемыми, а также ранее опубликованными реакциями ¹. Для проверки реакции с ацетоном остаток растворяли в спирте. Параллельно ставили контрольные опыты (биологический материал без хлорофоса). Достоверными для открытия извлеченного хлорофоса оказались резорциновая, холинэстеразная и изонитрильная пробы, реакции с ацетоном, 2,4-динитро-фенилгидразином, о-толидином и на фосфор. Опыт на животном был проведен следующим образом. Кролику через рот ввели 5% раствор чистого хлорофоса (950 мг/кг). Смерть наступила через 50 мин.

При исследовании по описанной методике хлорофос обнаруживали в желудке с содержимым, в тонком кишечнике с содержимым, в печени, почке и моче.

Выводы

1. Рекомендуются 3 новые, легко воспроизводимые, достаточно специфичные и чувствительные качественные цветные реакции на хлорофос.
2. Для обнаружения хлорофоса, извлеченного из биологического материала, можно применять реакции с ацетоном, о-толидином. 2,4-динитрофенилгидразином, на фосфор, а также резорциновую, холинэстеразную и изонитрильную пробы.

¹ Судебномедицинская экспертиза, 1964, № 1, стр 34.