Новая система растворителей для хроматографического обнаружения малых количеств строфантина Г в трупном материале

Разработанный ранее¹ хроматографический метод позволяет обнаруживать не менее 0,3 мг строфантина Г в 100 г свежего трупного материала; в получаемых хроматограммах зона строфантина располагается сразу же после (выше) зоны желтого пигмента животного происхождения, частично перекрываясь последней.

В дальнейшем в процессе изучения метода количественного определения строфантина в биологическом объекте мы разработали хроматографический способ очистки, обеспечивающий полное отделение зоны гликозида от желтого пигмента. Он состоит в использовании распределительной хроматографии на бумаге с забуференной системой.

В настоящей работе этот способ использован для повышения чувствительности метода обнаружения строфантина в трупном материале.

Опыты проводили по следующей методике.

К 100 г печени (средняя проба) человека, умершего от травмы, прибавляли определенное количество строфантина Г, я смесь оставляли до следующего дня при комнатной температуре. Изолирование строфантина производили 70° этанолом ранее разработанным методом. Сухой остаток обрабатывали метиловым спиртом, делили пополам и в виде стартовых полос шириной 0, 5—0, 6 см наносили на полоски ленинградской хроматографической бумаги «Б», предварительно пропитанной 0, 05 М раствором буры и (высушенной на воздухе. Хроматографировали 17—18 часов в системе растворителей н-бутанол — этанол — боратный буферный раствор с pH 11,0² (1:1:1). Хроматограммы высушивали на воздухе и проявляли одну м-динитробензолом, ³ другую — 2,4-динитродифенилсульфоном. В присутствии строфантина на хроматограммах образовывались голубые зоны различной степени интенсивности (в зависимости от количества строфантина).

Результаты представлены в табл. 1.

Наименьшее количество строфантина Г, которое может быть обнаружено в 100 г печени при проявлении одновременно 2 реактивами, составляет 0, 05 мг. При проявлении 2, 4-динитродифенилсульфоном удается обнаружить еще 0, 03 мг гликозида в 100 г печени. Таким образом, новая забуференная система растворителей позволяет повысить чувствительность обнаружения строфантина в 6 раз⁴.

Метод проверен в опытах на кроликах, которым подкожно вводили заведомо смертельные дозы строфантина Г (0, 7 мг на 1 кг живого веса).

Результаты представлены в табл. 2.

Результаты опытов указывают на применимость разработанного метода к исследованию органов животных, отравленных строфантином. Через 1—1,5 часа после введения строфантин не обнаруживается у них в печени и желчи, но обнаруживается в смеси паренхиматозных органов и в тканях, прилежащих к месту укола. При увеличении доз до 1, 5—2 мг на 1 кг живого веса, при которых кролики погибали через 50—60 мин., строфантин, хотя и в меньших количествах, но отчетливо обнаруживался также в печени с желчью и в крови.

Таблица 1

Граница обнаружения строфантина Г в свежем трупном материале

Обозначения: ++ результат резко положительный, + положительный, +— слабо положительный, — отрицательный.

Таблица 2

Обнаружение строфантина Г во внутренних органах, крови и моче кроликов-самцов

Выводы

1. Предложена новая система растворителей для хроматографического обнаружения строфантина в трупном материале, позволяющая повысить чувствительность обнаружения до 50 мкг гликозида в 100 г печени.
2. Рекомендуемый метод применим к исследованию внутренних органов.

¹ Вопросы судебно-медицинской экспертизы. Ашхабад, 1965, с. 140.

² Смешивали 0,27 мл 0,05 М раствора буры и 9,73 мл 0,05 М раствора карбоната натрия.

³ Л.М. Власенко. Сборник трудов IV Всесоюзной конференции судебных медиков. Рига, 1962, с. 546.

⁴ Указанная система растворителей использована для хроматографирования в тонком слое силикагеля. Чувствительность обнаружения строфантина (0, 3 мг в 100 г печени) осталась той же, что и при системе н-бутанол — вода/вода.