Топографическое гистохимическое определение активности некоторых дегидрогеназ в скелетной мышце в зависимости от давности наступления смерти

/ Жаров В.В. Ковальская Н.И.  // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1977 — №4. — С. 31-33.

Жаров В.В., Ковальская Н.И. Топографическое гистохимическое определение активности некоторых дегидрогеназ в скелетной мышце в зависимости от давности наступления смерти

Кафедра судебной медицины (зав. — проф. В.М. Смольянинов) II Московского медицинского института им. Н.И. Пирогова

УДК 340.624.6«401.74»: 616.74-008.931:577.152.11

TOPOGRAPHICAL HISTOCHEMICAL DETERMINATION OF SOME DEHYDROGENASE ACTIVITIES IN SKELETAL MUSCLE DEPENDING ON TIME OF DEATH

V. V. Zharov, N. I. Kovalskaya

Activities of some dehydrogenases in skeletal muscles of rats are decreasing regularly during the time interval of 24-43 hrs. after death. The fact may be a useful tool in death timing.

ссылка на эту страницу

Определяли активность дегидрогеназ (ДГ), характеризующих метаболизм в поперечно-полосатой мышце в различные сроки после наступления смерти: глюкозо-6-фосфата (Г6Ф-ДГ), α-глицерофосфата (α-ГФ-ДГ), лактата (ЛДГ), сукцината (СДГ), малата (МДГ), глутамата (ГДГ), восстановленных никотинамидадениндинуклеотида (НАДН-ДГ) и никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФН-ДГ) и алкоголя (АДГ). Работа проведена на белых беспородных крысах-самцах весом 180—200 г. Животных забивали, нанося им черепно-мозговую травму. Сразу после смерти (контроль) и спустя 6, 12, 18, 24, 36 и 48 ч иссекали участок бедренной мышцы. Трупы животных хранили при 16—18°С и относительной влажности воздуха 40—60%. Соответственно каждому сроку исследовали по 12 животных. Кусочки мышцы замораживали в жидком азоте и помещали в криостат, где изготовляли срезы толщиной 7 мкм. На подсушенных срезах проводили гистохимические реакции и срезы заключали в глицерин-желатин. Г6Ф-ДГ, α-ГФ-ДГ, МДГ, ЛДГ, ГДГ и АДГ определяли по методу Гесса, Скарпелли и Пирса (Э. Пирс, 1962), СДГ, НАДН-ДГ и НАДФН-ДГ — по методу Квалино и Хэйхо (I960).

В мышцах контрольных животных наиболее активными были ЛДГ, МДГ и НАДН-ДГ; активность α-ГФ-ДГ, СДГ, ГДГ и НАДФН-ДГ несколько ниже; при выявлении Г6Ф-ДГ и АДГ обнаружена лишь следовая реакция. Постоянно отмечалась отчетливая мозаичность в топографии изученных ферментов, особенно резко выраженная при выявлении СДГ, — в отдельных мышечных волокнах, их группах и даже в пределах одного мышечного волокна активность дегидрогеназ была различной. Внутриклеточно мелкие и средние гранулы моно- и диформазана располагались упорядоченно, линейно, подчеркивая часто поперечную исчерченность миофибрилл. Гораздо реже встречались крупные гранулы формазана и очаги с диффузным характером расположения гранул.

Прокрашивания цитоплазмы, как правило, не наблюдалось. В ядрах мышечных клеток активность ферментов не выявлялась. Следует отметить различия в активности ферментов мышцы отдельных животных.

 

Изменение активности дегидрогеназ в скелетной мышце в зависимости от давности наступления смерти

Примечание. (++++) — активность фермента очень высокая; (+++) —активность фермента высокая; (++) — активность фермента удовлетворительная; (+) — активность фермента низкая; (+— ) — активность фермента следовая; (—) — активность фермента отсутствует. В верхнем ряду каждой клетки представлена активность ферментов, встречаемая в подавляющем большинстве волокон; в среднем ряду— активность, встречаемая в меньшем количестве волокон^ в нижнем ряду— активность, встречаемая в единичных волокнах.

 

Через 6—12 ч после наступления смерти отмечалось некоторое снижение ферментативной активности, что выражалось в уменьшении количества мышечных волокон с высокой активностью дегидрогеназ, увеличении числа волокон с более низкой активностью, в укрупнении гранул как моно-, так и диформазана. При этом уменьшалось общее количество гранул, появлялись грубые, интенсивно окрашенные неправильной формы гранулы моноформазана. Выявлялись участки прокрашивания саркоплазмы. Начиная с 12-часового срока активность Г6Ф-ДГ практически отсутствовала, а АДГ сохранялась до 36 ч как следовая. К 18 ч активность ЛДГ, СДГ, МДГ и ГДГ значительно снижалась по сравнению-с контролем, оставалась на таком же уровне до 36 ч и несколько падала к 48-му часу. Активность НАДН-ДГ и НАДФН-ДГ, значительно снизившаяся к 18-му часу после смерти, продолжала в дальнейшем (24, 36 и 48 ч) падать. Начиная с 18-часового срока мозаичность несколько уменьшалась при выявлении всех изученных дегидрогеназ, за исключением СДГ. По мере увеличения срока смерти увеличивалась интенсивность прокрашивания саркоплазмы мышечных волокон; возрастало количество крупных гранул формазана на фоне снижения их общего числа; увеличивалось количество мышечных волокон, в которых активность дегидрогеназ по периферии выше, чем в центральных участках, а также «пустых» волокон»; изменялся характер расположения гранул формазана — часто вместо поперечной исчерченности отчетливо выявлялась продольная исчерченность, появлялись очень крупные и грубые пурпурные гранулы моноформазана; весьма часто можно было встретить участки с диффузным характером расположения крупных интенсивно окрашенных гранул. Динамика активности изученных дегидрогеназ отражена в таблице.

Выявленные изменения размера, свойств и характера расположения гранул формазана наряду с увеличением прокрашивания саркоплазмы скорее всего, согласно литературным данным, свидетельствует о снижении дегидрогеназной активности (К.М. Данилова, 1969; И.Д. Шперлинг и Н.Ф. Гусакова, 1972, 1976) . Так же, как и в миокарде, в скелетной мышце экспериментальных животных отмечается более медленное снижение дегидрогеназной активности по сравнению с другими органами (Ю.Л. Мельников, 1970; Е.Ф. Лушников и Н.А. Шапиро, 1974) и довольно длительное ее сохранение (до 2 сут). При сравнении динамики активности дегидрогеназ в скелетной мышце и миокарде в зависимости от давности наступления смерти следует отметить более быстрое снижение активности Г6Ф-ДГ, ЛДГ и СДГ в скелетной мышце, а также более высокий исходный уровень ЛДГ и СДГ в миокарде. Трактовка полученных результатов весьма затруднена из-за резко выраженной мозаичности в локализации ферментов, что связано с наличием морфологически и функционально различных типов мышечных волокон. Наиболее закономерным и демонстративным является снижение активности дегидрогеназ Г6Ф, лактата, сукцината, малата и НАДН к 18—24-му часу после наступления смерти.

Вывод

С помощью топографического гистохимического исследования установлена динамика снижения активности изученных дегидрогеназ в скелетной мышце до 48 ч после наступления смерти. Наиболее закономерным является снижение активности Г6Ф-ДГ, ЛДГ, СДГ, МДГ и НАДН-ДГ и 18—24-му часу после наступления смерти.

похожие материалы в каталогах

Давность наступления смерти

похожие статьи

Суправитальная зрачковая реакция / Гладких Д.Б. — 2012.

Возможности диагностики давности наступления смерти по изменениям в поясничных межпозвонковых дисках (сопоставление морфологических, иммуногистохимических и томографических результатов) / Бывальцев В.А., Степанов И.А., Семенов А.В., Перфильев Д.В., Белых Е.Г., Бардонова Л.А., Никифоров С.Б., Судаков Н.П., Беспятых И.В., Антипина С.Л. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 2017. — №4. — С. 4-8.

Изменение содержания калия в жидкости стекловидного тела в зависимости от срока смерти / Марченко Н.П. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1966. — №4. — С. 3-7.

Е.М. Евгеньев-Тиш. Установление давности смерти в судебномедицинской практике (пособие для врачей и студентов). Казань, 1963, 181 стр. / Кононенко В.И. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1966. — №1. — С. 58.

Влияние алкогольной интоксикации на динамику активности ряда ферментов при установлении давности наступления смерти / Мельников Ю.Л., Мирошник Г.М. // Судебно-медицинская экспертиза. — М., 1977. — №4. — С. 28-31.